细胞生物学实验10,基地,01111166,王宪宁课件.pptVIP

植物细胞骨架的光学显微镜观察 生物学基地 王宪宁 2013／4 实验目的 观察光学显微镜下细胞骨架的结构，了解显示植物细胞骨架的方法及其原理。 实验原理 细胞骨架包括微管、中间纤维、微丝。当用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，经过固定和考马斯亮蓝R250染色，从而在光镜下观察到细胞骨架的网状结构。 实验用品 ㈠器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子 ㈡试剂：⒈M—缓冲液;50mmol/L咪唑，50mmol/L KCL;0.5mmol/LMgCL2,1mmol/L EGTA(乙二醇双（a-氨基乙酸）醚四乙酸），0.1mmol/L EDTA,1mmol/L巯基乙醇或DTT(二硫酥糖醇） ⒉6mmol/L PH6.8磷酸缓冲液。 ⒊1% TritonX-100，用M—缓冲液配。 ⒋0.2%考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml,冰乙酸7ml ,蒸馏水46.5m. ⒌3%戊二醛，用6mmol/L磷酸缓冲液（PH6.8)配制。 ⒍5%、7%、95%乙醇。 ⒎叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 ㈢材料：洋葱鳞茎。 试剂的作用 细胞骨架在通常情况下不稳定：如低温、高压、饿酸处理等。当用适当浓度的Tri