第十三章细胞衰老与凋亡(4学时)解答.pptVIP

第十三章 细胞死亡  与细胞衰老 第一节 细胞死亡 细胞死亡又叫程序性细胞死亡（programmed cell death, PCD） 包括：细胞凋亡，细胞坏死，自噬 一、细胞凋亡(Apoptosis) ●细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的分子调控机理 （一）细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●概念： 细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程。 ●发现 Kerr 1965发现，1972命名为细胞凋亡（apoptosis） ●生物学意义：细胞凋亡对于多细胞生物个体发育的正常进行，自稳平衡的保持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非常关键的作用。 生物个体发育中的细胞凋亡 蝌蚪尾的消失；骨髓和肠的细胞凋亡 生物个体发育中的细胞凋亡 发育过程中手和足的成形过程 生物个体发育中的细胞凋亡 脊椎动物的神经系统的发育 （自稳态平衡保持） 第一节 细胞凋亡(Apoptosis) ●细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的分子调控机理 （二）细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的形态学特征 ●细胞凋亡的生化特征 ●诱导细胞凋亡的因子 ●细胞凋亡的检测 细胞凋亡的形态学特征 ◆凋亡的起始：细胞表面的特化结构如微绒毛消失，细胞间接触的消失，但细胞膜依然完整；线粒体大体完整，但核糖体逐渐从内质网上脱离，内质网囊腔膨胀，并逐渐与质膜融合；染色质固缩，形成新月形帽状结构等形态，沿着核膜分布 ◆凋亡小体的形成：核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞质膜所包围。细胞表面产生了许多泡状或芽状突起，逐渐形成单个的凋亡小体 ◆凋亡小体逐渐为邻近的细胞吞噬并消化 细胞凋亡的生化特征 ◆细胞凋亡的主要特征是形成大小为 180～200bp特征性的DNA ladders 细胞凋亡的检测 ◆形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察 ◆DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带 ◆TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端标记法 ◆彗星电泳法（comet assay） ◆流式细胞分析 根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶使DNA 产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细 胞，同时又能观察细胞的周期状态。 第一节 细胞凋亡(Apoptosis) ●细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的分子调控机理 （三）细胞凋亡的分子调控机理 ●线虫(C.elegans)凋亡研究发现ced3,ced4基因促进细胞凋亡，ced9基因阻止ced3/ced4的激活，抑制细胞凋亡。 ced3哺乳类同源物是ICE(Interleukin-1-converting enzyme)，即Caspase1 ced4同源物：Apaf-1 ced9同源物：Bcl-2 Caspase家族 ◆Caspase家族 Caspase活性位点是半胱氨酸(Cysteine)，裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽键，因此称为Cysteine aspartic acic specific protease，即Caspase（凋亡酶） caspase 超家族成员及其相应底物 Caspase活化 Caspase分为15种，两类，启动者和执行者，自身以非活化的Procaspase存在 启动者：可以自剪切而激活。当天冬氨酸后边的肽链被切断后，变成大小两个亚基，从而具有活性。包括：caspase2,8,9,10 执行者：其激活依赖于启动者Caspase，包括caspase3,6,7 Fas参与的细胞凋亡途径（外源途径） 凋亡信号通路 Fas配体（如肿瘤坏死因子）与Fas结合，使得Fas三聚化 DD构象发生变化，与接头蛋白（FADD）结合 接头蛋白具有与caspase8结合的能力，形成死亡诱导信号复合物DISC caspase8能够 自剪切而激活 启动caspase级联反映，使得caspase3激活 降解胞内的功能蛋白和结构蛋白，使细胞凋亡 下游Caspases活化后，作用底物： 裂解核纤层蛋白，导致细胞核形成凋亡小体 裂解DNase结合蛋白，使DNase释放，降解DNA形成DNA Ladder; 裂解参与细胞连接或附着的骨架和其他蛋白，使凋亡细胞皱缩等 线粒体起始的细胞凋亡途径（内源途径） Bcl-2是一种原癌基因，