高中生物选修一基因工程的基本操作程序.pptVIP

2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： DNA分子杂交技术过程详解—— 从转基因生物中取出含有目的基因片段的双链DNA，然后加热使之变性成两条单链。 再用DNA探针与这两条单链分别杂交（即复性，产生双链）。 所谓的探针就是含有目的基因的同位素标记过的DNA片段。 当目的基因成功导入我们要测的基因上时，探针就可以与之进行碱基配对。当目的基因未成功导入时，探针便无法与之正确配对形成双链产物。 这样，通过检测新合成双链产物的放射性就可以判断导入是否成功了。 Western杂交（抗原—抗体杂交） 具体做法是： 第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质； 第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）； 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； 第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上； 第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。 由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农