7-8动物基因工程讲述.pptVIP

三 表达水平的检测 获得高效表达、具有较强生物学活性的目的是蛋白是转基因的主要目的之一。 得到的目的蛋白的的形式： 表达于细胞内，可通过对组织或细胞裂解获取； 分泌到细胞外，可通过酶学或免疫学方法进行测定。 1、报告基因 报告基因是编码容易检测的蛋白质的核苷酸序列，一般用以替换难于测定的蛋白质基因，或制备融合蛋白，或利用IRES与目的蛋白形成一条mRNA序列，分别翻译出两种蛋白，来研究目的蛋白的功能及其表达特性。 2、Northern杂交 可以检测转基因动物或转染细胞是否转录出目的基因所对应的mRNA 3、反转录PCR（RT-PCR） 是将由mRNA反转录产生的cDNA第一链为模板进行目的基因或片断扩增的PCR反应。 利用RT-PCR方法扩增出目的基因的电泳条带，以检测目的基因是否表达。 4、聚丙烯酰胺凝胶电泳 分析靶组织或转基因细胞的总蛋白，依据相对分子质量标准判定是否有目的蛋白条带出现，进而判定外源基因的表达情况，同时可以初步判定目的蛋白的表达水平。 5、Western杂交 可用来检测混合蛋白质样品中是否存在目的蛋白，最小检出量为1ng。 6、目的蛋白的生物活性 应选择相应的生物学测定方法进行测定。当产品生物学活性较天然蛋白活性低时，应当对蛋白质结合的功能分子集团进行研究。 四 转基因动物传代与检测