银杏黄酮的制备.docVIP

实验申请 实验项目：银杏黄酮的制备 实验原料：银杏叶粉，对照品芦丁 实验仪器：（1）大孔吸附树脂 （2）722 型分光光度计 （3）真空泵 （4）超声波细胞粉碎机（5）微波炉 实验试剂：乙醇（20%、70%、90%），亚硝酸钠溶液（5%），1M NaOH， 硝酸铝（10%） 耗材及辅助器材：（1）移液管 1ml×1，5ml×1，10ml×1 （2）容量瓶 25ml×12 ，500ml×1，100ml×4 （3）洗耳球（4）胶头滴管（5）布氏漏斗 （6）量筒 20ml×1 ，100ml×1（7）抽滤瓶 实验操作 操作步骤： 黄酮的提取： 1. 校正天平，然后称取处理好的银杏叶粉末 1g。 2. 将所称样品加入 50ml70%乙醇中，搅拌混匀。 3. 将上述溶液在微波炉中火条件下（10s+10s）处理3 次。 4. 然后超声破碎（5s+6s）60 次,测量体积V1，然后搅拌6min. 5. 用循环水真空泵过滤。 6. 滤液用大孔树脂法精制 7. 装柱：树脂柱高度约为 4cm。 8. 取滤液上柱吸附，重复2 次，收集流出液，记录体积V2。 9. 洗涤：用无水乙醇洗涤树脂 2 次，流出液为无色透明， 再用高纯水洗涤树脂柱，直至无醇味。 10. 洗脱：用90%乙醇进行洗脱，收集流出液V3，进行黄酮 浓度测定。 11. 制作芦丁标准曲线并测定黄酮含量。 12. 结束，整理实验台。 标准曲线的制定及黄酮含量的测定： 1.准确配制 0.292g/L 的芦丁标准液 2.分别取1ml，2ml，3ml，4 ml ，5 ml，6 ml，7 ml，8 ml，9 ml， 标准液和样品液1ml 置于25ml容量瓶中 3.加20%乙醇至12.5ml,加0.5ml亚硝酸钠溶液（5%） 4.放置5min 后加0.5ml 硝酸铝（10%） 5.放置5min 后加5ml 1mol/LNaOH，混匀 6.用20%乙醇稀释至刻度，10min后在510nm 处进行比色测定， 同时做空白对照。记录数值。 7.结束，整理操作 操作流程图： 样品溶解 测V1 收集V2 实验记录 试管标号 0 1 2 3 4 5 样品 芦丁标准 液/ml 0 1 2 3 4 5 7 芦丁标准 液含量 （mg） 0 0.292 0.584 0.876 1.168 1.46 x OD 值510nm 0 0.059 0.118 0.170 0.230 0.283 0.072 实验总结 数据统计： 试管标号 0 1 2 3 4 5 样品 芦丁标准 液/ml 0 1 2 3 4 5 7 芦丁标准 液含量 （mg） 0 0.292 0.584 0.876 1.168 1.46 0.401 OD 值510nm 0 0.059 0.118 0.170 0.230 0.283 0.072 已知芦丁标准液的浓度c=0.292g/L，所以有上述计算结果。 计算： 1ml样品的OD值为0,072，带人代入标准曲线Y=0.1967X-0.0069 X = (mg) 叶片干粉质量m1=3.015g 最后流出液体积V=41ml 银杏叶粉黄酮的含量 得率= X× ÷m ÷1000×100% =0.401×÷3.015 ÷1000 ×100% =0.273% 误差分析： 1.仪器与操作人员本身存在着误差。 2.由于抽滤两次，所以黄酮含量有所损失 3.在吸附前，虽然经过多次洗树脂柱，但由于某些因素，树脂柱可能 没有完全洗净。 4.为了保证精制黄酮纯度高，多次用90%乙醇洗涤，所以最终 流出液体积较大。 5.在进行吸光值测量时，只用配套的两支比色皿进行比色，一支 测空白，另一支测其它，这样能减少比色皿带来的实验误差。比色 皿放置于第1、3 暗格中，这样方便取用。 注意事项： 微波萃取与超声波破碎时，中间应间隔几秒，间隙时间应大 于或等于超声时间，以便于热量散发。时间设定应以超声时间短，超声次数多原则，可延长超声机子以及探头的寿命。 2. 树脂柱底端应放一团棉花，防止液体未被吸附就流下； 在装柱时必