血管抑素基因治疗Lewis肺癌移植瘤小鼠的实验研究.docVIP

血管抑素基因治疗Lewis肺癌移植瘤小鼠的实验研究 　　【摘要】 目的：观察血管抑素基因对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用。方法：建立C57BL/6j小鼠肺癌模型，30只荷瘤鼠按照随机数字表法分为生理盐水空白对照组、阳离子脂质体对照组、血管抑素基因（PAng）治疗组，每组10只。以阳离子脂质体为介导，将血管抑素基因的重组质粒直接注入移植瘤内，每周3次，共5周，每周测瘤体大小1次，第7周末处死所有小鼠，观察瘤体大小变化、肺表面转移灶数、小鼠生存期等。结果：治疗组小鼠移植瘤生长速度减慢，瘤体缩小，肺内转移少，与对照组比较差异有统计学意义（P0.05），小鼠活动能力、饮食、对外界刺激的反应能力均无明显改变，生存期明显长于对照组（P0.05）。结论：阳离子脂质体介导血管抑素基因可有效地抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移。 　　【关键词】 阳离子脂质体； 血管抑素基因； Lewis肺癌； 小鼠移植瘤 　　肿瘤的生长和转移与血管生成密切相关[1]。20世纪70年代初Folkman[2]首次提出肿瘤的生长、发展和转移依赖血管形成的观点。以肿瘤新生血管为靶点，抑制肿瘤血管生成，阻断肿瘤生长所需营养物质及转移途径，已成为近年来治疗肿瘤的新方法[3]。本文建立Lewis肺癌小鼠移植瘤动物模型，将血管抑素基因的质粒混合物直接注射于移植瘤体内，观察瘤体大小变化，移植瘤小鼠对外界的反应能力、饮食、营养状况、生存期等，同时计数肺表面肿瘤转移灶数，来评价血管抑素基因的抑瘤能力。 　　1 资料与方法 　　1.1 建立Lewis肺癌小鼠移植瘤模型 在无菌条件下取出Lewis肺癌种鼠的肿瘤组织，去除筋膜组织，配制成1×107/mL的细胞匀浆悬液，每只小鼠右腋皮下注射细胞悬液0.2 mL，建立Lewis肺癌小鼠移植瘤模型，室温下饲养[4]。 　　1.2 血管抑素基因的重组质粒及转染 取含血管抑素基因的质粒（PAng）（南昌大学二附院分子实验室保存）和SA脂质体，按质粒DNA与SA脂质体重量比为1：7混合，轻摇混合物，室温下静置20 min后进行试验[5]。 　　1.3 移植瘤小鼠分组及治疗 观察移植瘤瘤体生长，选择直径生长至8 mm左右成瘤小鼠30只，按照随机数字表法分为3组，每组10只。将SA脂质体-质粒DNA混合物用微量注射器进行瘤内注射治疗，3次/周，周一、周三、周五，共计5周。（1）生理盐水空白对照组：0.9%氯化钠60μL/次/只，（2）SA脂质体对照组：0.9%氯化钠10μL+脂质体50μL/次/只，（3）PAng治疗组：PAng10μL+脂质体50μL/次。 　　1.4 观察指标 （1）肿瘤体积的变化：实验期间，每周一用游标卡尺测量瘤体横直径，按v=ab2/2计算瘤体大小。（2）肺内转移灶数：实验结束后，取出死亡处或死后小鼠的肺脏计数肺表面肉眼可见的转移灶数，HE染色证实肺内转移。（3）一般情况：实验期间，观察小鼠对外界的反应能力及活动能力、饮食、营养状况等。（4）生存期：以小鼠接种癌细胞之日为起点，直至小鼠死亡或被处死时为止，计算每只实验小鼠生存天数。 　　1.5 统计学处理 采用SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 三组治疗后小鼠移植瘤平均体积的比较 Lewis肺癌细胞悬液接种于C57BL/6j小鼠右腋皮下后3～5 d见生长出大小约2 mm肉眼所见肿瘤。两对照组瘤体呈生长迅速，坏死结痂直至小鼠死亡；PAng组治疗后第5天见移植瘤生长开始减慢，第15天后体积开始缩小，第22天PAng组平均体积为（156±8）mm3、与空白盐水对照组（5207±126）mm3及SA脂质体对照组（5436±131）mm3比较差异均有统计学意义（P0.05），第5周末，PAng组有2只小鼠瘤体肉眼消失，见表1。 　　2.2 小鼠进食、营养、反应能力等变化 治疗组小鼠治疗前后活动能力，对外界刺激反应能力无明显变化，进食良好，营养状况较佳。对照组小鼠对外界刺激反应能力、活动能力逐渐变差，进食差，消瘦，渐呈恶病质，直至死亡。 　　2.3 三组肺内转移灶数目情况 两对照组小鼠肺脏肉眼所见色苍白，表面粗糙、凹凸不平，见较多鱼肉样结节样病灶，结节样病灶病理切片HE染色后，镜下见大量核大、深染、形状不规则肿瘤细胞（图1）。治疗组仅3只小鼠肺脏色粉红，表面光滑见数个较小结节样病灶，病理组织学仅见少许肿瘤细胞（图2），其他小鼠均未见明显病灶，病理组织学未见肿瘤细胞。 　　2.4 三组小鼠生存期比较 对照组小鼠在35 d内全部死亡，观察期结束PAng组死亡4只，第7周末处死所有小鼠。治疗组平均为45 d以上，与生理盐水空白对照组（3