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故障分析和思路 李毅 一、故障代码表 二、根据反应曲线判断故障 1、反应曲线说明 BS-300的反应曲线是BS-300的一大亮点。通过曲线和反应数据,几乎所有与结果有关的故障,我们都可以在反应曲线上找到原因。 2、反应曲线举例(GGT) 3、概述 反应曲线的纵轴为吸光度 ,这里的数值是真正的吸光度乘以10000。 反应曲线的纵轴间隔是不固定的。 反应曲线的横轴为测量周期,BS-300的测量周期为12秒。 我们把一个正常的双试剂反应曲线分为6个部分 :A为加入试剂1; B为试剂1升温; C为加入样本; D为样本和试剂1孵育时间;E为加入试剂2;F为反应开始直到结束。 4、各阶段具体描述 A阶段(加入试剂1) 测试周期为0的一点为杯空白(BS-300是用杯空白来校零的,反应曲线上所有的吸光度都是实际的吸光度减去杯空白的吸光度),在第1个测试周期,试剂1加入反应杯中,这一点的吸光度应该为试剂1的试剂空白。对不同的试剂,A点的吸光度会有不同,我们要认真阅读试剂说明书。 B阶段(试剂1升温) 试剂一在升温的过程中吸光度应该是没有什么变化的,其中某些试剂在此过程中吸光度会缓慢上升共计200(0.02A)左右也是有的,但是连续的两个检测周期吸光度的波动范围正常的是20以内。如果远远超过这个限制,比如100以上,我们要考虑: 反应杯中有干扰因素:常见的是气泡或杯子不干净。这种波动也局限于个别杯子中,其他大部分杯子会是好的。 光电采集时间和光路配合不好:常见的是光电采集位置参数变化或反应盘转动不稳定。这种波动对于某个波长会在所有的杯子中出现,而且波动的程度也相对较大。 光路本身不稳定:常见原因是光源灯老化。光源灯使用2000小时以上便无法再保证性能。可以通过更换光源灯进行确认。 C阶段(加入样本) 在加入样本的一瞬间,根据所选择的波长和样本本身的颜色,可能会导致这一点吸光度的上升或下降。如果我们在反应曲线或者反应数据中可以清楚的观察到这一点的吸光度变化,我们就可以确认样本是加进反应杯中了。同时比较重复性测试的几个相同测试的反应曲线变化值,我们就可以大致确认样本的加入量是否一致。 出现吸光度不一致的问题可能原因:样本针甩样、样本针液面检测故障、液路泄漏、搅拌杆不搅拌、搅拌杆位置太高、样本注射器位置不固定导致的。 D阶段(试剂1和样本混合) 这段时间里,样本和试剂1在37℃的环境下会进行孵育的反应,从而吸光度会有一些变化,根据项目的不同,变化的情况会不一样,但是基本上变化的程度都不大,而且这段的反应曲线应该是平稳的或者是连续变化的。 如果出现明显的波动(相邻的采样周期吸光度波动超过50),要考虑是否搅拌杆有打杯的情况。 E阶段(加入试剂2) 加入试剂2的瞬间,理论上这一刻的吸光度应该是双试剂试剂空白+样本空白的吸光度的和 ,但是由于试剂和样本之间发生了化学反应,可能实际吸光度会有所变化。 比如ALT是一个下降的反应,第二试剂中没有NADH,而总体积变大,所以在加入第二试剂这一刻,吸光度应该比D段有一个明显的下降;而R-GT是一个上升的反应,第二试剂中的有效成分会导致吸光度一个明显的上升,但是总的吸光度应该在试剂空白(0.7)附近,如上图的E点为6500左右。 如果E点没有吸光度的变化,我们可以考虑第二试剂是否没有加入;如果E点的吸光度变化太大,比如升到50000以上,我们必须考虑是否有可能是试剂加入过程中产生了气泡或者有污染物带入。当然,搅拌杆打杯也会导致类似的情况。 F阶段(反应开始到结束) 这时的曲线变化完全取决于当前测试的方法。终点法、动力学法、固定时间法都应该符合各自典型的反应曲线,同时要注意说明书中对反应上升和下降的描述。这一段反应曲线是生化仪获得反应度并计算出浓度的基础,如果这段反应曲线出现不正常的波动,常常会导致结果的错误。 反应度不足:比如葡萄糖的测试,作为终点法,F段最后一点的吸光度和D段后端的吸光度的差值就是我们要测量的反应度。5.55g/l的反应度应该在0.3A这个数量级,从反应曲线上看吸光度的变化量应该在3000以上,如果出现反应度在不同的数量级,比如500或者20000,都应该考虑是否试剂失效或其他异常情况。 F阶段(续) 反应曲线波动:稳定状态的反应曲线的波动应该不会大于20,由于不同的试剂配方和反应的不尽相同,很难给出一个确定的值来界定波动的范围。但是一般测试的波动如果大于100,就很有可能会有问题。例如搅拌杆打杯、气泡等等。 由于各个测试的反应度不同,吸光度的波动对测试的影响就不尽相同。比如搅拌杆打杯引起的吸光度波动一般在50到300之间,对于白蛋白(反应度为10000以上)就影响很小,但是对总胆和直胆的影响就很大(反应度300左右) 。 三、液面检测问题 液面检测问题大概分3种:
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