依达拉奉对心肺复苏小鼠脑的保护作用.docVIP

依达拉奉对心肺复苏小鼠脑的保护作用 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.08.015 　　基金项目：深圳市科技计划项目（201103250）；龙岗区科技创新局基金（YS2011041） 　　作者单位：518172深圳，深圳市龙岗区人民医院急诊科（王合金），重症医学科（阳书坤、刘渠），心内科（黄战军）；深圳市人民医院（高占良）；深圳市疾病与预防控制中心毒理室（何建凡）心肺复苏（CPR）后的存活率和神经功能的恢复率依然很低[1]，主要的并发症为神经功能损害和多器官功能衰竭[2]。依达拉奉对缺血性脑损伤有保护作用，能改善缺血性脑损伤患者神经功能的预后。本研究拟通过检测复苏后小鼠血清和脑组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛 （MDA）和S-100蛋白浓度变化，从而探讨早期使用依达拉奉对心肺复苏后小鼠脑组织的保护作用。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物及分组 　　选择36只雄性、体质量在20～30 g之间的清洁级昆明小鼠（深圳市疾病预防与控制中心提供），在室温条件，白昼各12 h交替、标准饲养1周后再进行相关实验。实验动物随机（随机数字法）分为3组：实验组（依达拉奉组）、对照组和假手术组（健康组）。 　　1.2方法 　　1.2.1模型制备心肺复苏模型的制作参照文献[3-4]进行。小鼠经腹腔注射乌拉坦（1 mg/g）麻醉，经口腔插22 G管，机械通气。维持体液平衡，在手术之前给予等渗盐水15 μl/g。左侧颈动脉插管测量血压（通过压力换能器与BL- 420E生物机能实验系统连接以监测动脉压）和心率。左侧颈静脉置管用于给药。 　　心脏骤停模型制备：经食管心室起搏诱发室颤，4极5F起搏电极经口插入食管约4 cm，电极近端与BL-420E生物机能实验系统的电生理刺激输出端相连。先测定心室起搏阈值（通常起搏电压为15～18 V，脉宽5～8 ms），诱发室颤电压应高于起搏阈值3～5 V。采用连续快速起博诱发室颤，所需参数为：电压20 V、脉宽10 ms、频率20 Hz。当起搏90 s后暂停起搏并观察1～2 s，如心电图显示起搏诱发出来的室颤自动转律时，应立即再起搏30 s，直至诱发出的室颤持续存在、或出现无脉性电活动或一条直线（无心电活动）为止，通常需要起搏90～180 s不等。心脏骤停成功诱导标准为动脉血压消失和心电图证实出现心搏停止。在心搏停止期间，机械通气停止3 min。心搏停止3 min后，予以胸心外按压。人工手法进行胸外心脏按压，频率200次/min，按压深度为小鼠胸廓前后径1/3。同时给予肾上腺素（0.4 μg/g），必要时给予2 J双相波电除颤。同时恢复机械通气。 　　机械通气潮气量为12 μl/g，呼吸频率为150次/min，FiO2为1.0。当自主循环恢复后，呼吸频率减少为130次/min，同时FiO2调整为0.4。CPR不成功的标准心肺复苏10 min后仍无生命体征。肾上腺素在CPR过程中最大剂量为重复使用3次。 　　1.2.2给药方法心肺复苏成功后实验组立即给予静脉注射依达拉奉注射液3 μg/g，对照组给予注射等量的生理盐水。假手术组只进行相关手术操作，不制备心肺复苏模型。继续其他相关治疗。 　　1.2.3小鼠血清和脑组织匀浆SOD、MDA和S-100蛋白含量的测定复苏后12 h后全部处死所有小鼠，并采取断头法采取小鼠血液3 ml，3000 r/min离心15 min，取上清液，-70 ℃冰箱保存批量检测。 　　取血后迅速打开大脑，取一侧脑组织，以脑组织（mg）：生理盐水（ml）=10∶1的比例在盛有冰块的器皿中用匀浆机研磨成脑匀浆，4 ℃下3000 r/min离心15 min，取上清液进行上述指标检测。用化学比色法检测SOD、MDA浓度（试剂购置美国Beckman公司）。 　　使用酶联免疫吸附法进行血清学S-100蛋白含量测定（试剂购置南京建成生物有限公司）。上述操作严格按照试剂操作说明操作。 　　1.2.4脑细胞组织病理学观察取一侧大脑半球置10%福尔马林溶液固定 24 h。系列酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，常规制作石蜡切片，苏木素-伊红（HE）染色，显微镜下观察大脑皮层神经细胞学病理变化。 　　1.3统计学方法 　　计量资料均以均数±标准差（x±s）表示，运用统计软件SPSS 10.0进行分析，包括单因素方差分析、多组均数两两比较的Bonferroni法或Tamhane法检验和Pearson相关分析。以P0.05为差异具有统计学意义。 　　2结果 　　2.1复苏后小鼠心电图 　　复苏后小鼠心电图，见图1。 　　图1复苏后小鼠心电图2.2脑组织病理学变化 　　假手术组大脑皮层神经细胞核大，形态规则，核仁明显，尼氏小体可