2014hu仪器分析第3章分子发光分析法..pptVIP

第三章 分子发光分析法 一、分子荧光与磷光产生过程 luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 二、激发光谱与荧光光谱 excitation spectrum and fluore-scence spectrum 三、荧光的产生与分子结构关系 Relation between fluorescence and molecular structure 四、影响荧光强度的因素 Factor influenced fluorescence 3.1.1荧光与磷光的产生过程 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 辐射能量传递 （发射光子） 非辐射能量传递 化学反应 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 3.1.2 激发光谱与荧光(磷光)光谱 excitation spectrum and fluore-scence spectrum 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 3.1.3 荧光的产生与分子结构的关系 relation between fluorescence and molecular structure 5.内滤光作用和自吸现象 6.溶液荧光的猝灭 第三章 分子发光分析法 3.2.1 仪器与结构流程 instrument and general process 3.2.2 荧光分析法和应用 fluorescence analysis and application 3.2.3 磷光分析法的应用 phosphorescence analysis and application 3.2.1仪器结构流程 同步扫描技术 可获得三维光谱图的仪器 磷光检测 3.2.2 荧光分析方法与应用 2.定量依据与方法 （2）定量方法 3.荧光分析法的应用 ? 1．荧光胺(fluorescamine)：能与脂肪族或芳香族伯胺类形成高度荧光衍生物，典型反应如下： 荧光胺及其水解产物不显荧光。100mg荧光胺溶于100ml无水丙酮中，放置24小时后即可使用。取相当于10mg药物的甲醇或水溶液0.lml，加适宜pH值的磷酸缓冲溶液5ml，加荧光胺试剂0.lml，混合，放置15分钟后测定荧光强度。荧光条件为：λex=275、390nm，λem=480nm。 2．邻苯二甲醛(OPA) 在2?巯基乙醇存在下，pH9～10的缓冲溶液中OPA能与伯胺类、特别是除半胱氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸外的a?氨基酸生成灵敏的荧光产物。取OPA 500mg溶于10ml乙醇中，加200ml 2?巯基乙醇，将此混合液加至1L 3％的硼酸溶液中，再用KOH调节至pH10，即为常用试剂溶液。荧光条件为：λex=340nm，λem=455nm。 3．1?二甲氨基?5?氯化磺酰萘(Dansyl-Cl，丹酰氯) 能与伯胺、仲胺及酚基的生物碱类反应生成荧光性产物。取50mg或100mg试剂，溶解于500ml无水丙酮中即可使用。与丹酰氯类似的一个试剂是丹酰肼(Dansyl－NHNH2)，它能与可的松的羰基缩合，产生强烈荧光。荧光条件为：λex=365nm，λem=500nm左右。 丹酰氯试剂不稳定，其水解产物Dansyl?OH呈蓝色荧光，必须暗处保存，每周重新配制。 无机离子一般不显荧光，与有机试剂形成有荧光的配合物后，可测量约60种元素及离子 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土——采用荧光分析法 氟、硫、铁、银、钴、镍——采用荧光熄灭法测定 铜、铁、钴、锇及过氧化氢——采用催化荧光法测定 铬、铌、铀、碲——采用低温荧光法测定 铈、铕、锑、钒、铀——采用固体荧光法测定 2.无机化合物的分析 第二节 分子荧光与磷光分析法 molecular luminescenceanalysis molecular fluorescence and phosphorescence analysis 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 基本流程如图： 单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器； 光源：氙灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区) 检测器：光电倍增管。 1.荧光光谱仪的基本结构 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 I0 透射光 检测器 信号显示系统 F It 狭缝 lex、I0 lem、If 荧光光谱仪与紫外-可见分光光度计光路设计有什么区别？ 2.荧光光谱仪的主要部件 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 为荧光测