应用模糊集理论对壮肝逐瘀煎抗肝纤维化的优化研究.docVIP

应用模糊集理论对壮肝逐瘀煎抗肝纤维化的优化研究 　　[摘要] 目的 优化壮肝逐瘀煎配伍，创制高效新方。 方法 SPF健康、清洁级大鼠260只，随机取15只作为正常对照组（A组）。剩余大鼠采用CCl4诱导的肝纤维化模型，于第4周末造模大鼠随机处死5只进行病理形态学检测证实造模成功后，将其余造模大鼠随机分为病理模型组（B组）、壮肝逐瘀颗粒配比1～28组、大黄蛰虫丸组（C组），每组8只，分别给予生理盐水、大黄蛰虫丸、正交设计后壮肝逐瘀1～28组灌胃。观察治疗前后大鼠血清中白介素（IL-2、6、10）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）；肝组织羟脯氨酸（Hyp）、过氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量及基质金属蛋白酶（MMP-1、2、3）、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1、2）mRNA的水平，通过模糊数学进行数据处理。结果 在壮肝逐瘀煎颗粒各组及C组、B组中壮肝逐瘀煎颗粒第11剂量组，治疗后肝纤维化大鼠血清IL-2、IL-10、SOD水平较高，血清IL-6、TNF-α及肝组织Hyp、MDA、MMP-1，2，3水平较低。 结论 通过对原方剂组进行拆方后分出27个方剂组加原方组共28组，并对实验的各指标进行运算和分析后结果认为壮肝逐瘀煎配比11组（柔肝化纤颗粒）最优。 　　[关键词] 壮肝逐瘀煎；抗纤维化；模糊数学；优化；实验研究 　　[中图分类号] R575.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）10（b）-0014-04 　　壮肝逐瘀煎是在已故的全国有名老中医林沛湘教授治疗慢性肝炎、肝炎肝硬化有效验方的基础上组方而成，经过多年实践其有效性不容置疑[1-4]，其经验和理论的积累可能通过数十载而得来，理论的构建是极其艰苦的，一旦建成如不能通过技术将其复制出来，推广出去，将大大降低其价值及社会贡献。现代科学具有很强的推演体系，使其可以通过以现代技术为中介进行大规模的推广应用。这里需要说明的是，现代技术是一种具有很强的复制功能和很好的可重复性的手段[5]。本研究复制四氯化碳（CCl4）复合因素大鼠肝纤维化模型，以药效模型为指标，基于模糊集理论建立药物与各功效指标的数学模型，对方中各成分进行量化控制，分析壮肝逐瘀煎中各药物的重要性，去除方中冗余成分，使组方更科学、精确。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　健康清洁SPF大鼠260只，雌雄各半，由广西医科大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK桂2010-0010。 　　1.2 药物与试剂 　　壮肝逐瘀煎（黄芪45 g，牡蛎30 g，土鳖虫5 g，鳖甲30 g，黄精20 g，枸杞20 g，薏苡仁45 g，橘红10 g，泽兰30 g，炒鸡内金15 g，虎杖20 g，大枣15 g）由广西中医药大学第一附属医院药剂科提供，按等效剂量计算大鼠所需全方及拆方生药量，经浸泡、煎煮3次后、过滤及水浴蒸发制成每毫升含1 g生药的水煎液（浓度100%）2000 mL药液，高温灭菌后4℃冰箱保存备用。大黄蛰虫丸0.2 g/kg（广东阳江制药厂有限公司，批号，4℃冰箱内保存备用。CCl4分析纯购自于中国医药集团上海化学试剂公司。肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）-2、IL-6、IL-10均为武汉博士德生物工程有限公司生产。 　　1.3 编制因素位级表 　　壮肝逐瘀煎由12味药物组成，分析方中各药用药与否的差别、药物用量的差别、各药物搭配的差别，故为12因素3位级，采用列表。见表1。 　　1.4 动物分组 　　健康清洁级SPF大鼠260只，体重120～150 g，随机取15只作为正常对照组（A组）。剩余大鼠进行肝纤维化造模，于第4周末造模大鼠随机处死5只，证实肝纤维化形成后，将其余造模大鼠随机分为病理模型组（B组）、大黄蛰虫丸组（C组）、壮肝逐瘀煎配比1～28组，每组8只。 　　1.5 造模及给药方法 　　采用韩德五等[6]报道的方法复制CCl4复合因素大鼠肝纤维化模型，为了防止肝脏自然修复对实验结果造成的影响，各组于用药开始后仍每周注射40% CCl4油剂1.5 mL/kg 1次，A组除外。造模4周后各组分别予以壮肝逐瘀煎配比1～28组药液、生理盐水（A、B组），大黄蛰虫丸（C组）灌胃给药，灌胃液体量为0.1 mL/kg，1次/d，其浓度及等效剂量按体表面积折算。 　　1.6 标本制备 　　各组于用药治疗后4、8、12周，禁食12 h，随机选取5只大鼠称重，经1%戊巴比妥麻醉，股静脉采血后处死，剖取肝脏，取肝脏右叶相同部位组织1块置入10%甲醛，作常规石醋切片，将余下肝脏组织于液氮中速冻，-196℃保存，以备匀浆测羟脯氨酸（HYP）、提取mRNA及RT-PCR分析用。血清于-70℃冰箱内保存备检测。