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异柠檬酸脱氢酶1基因多态性对非洲人群急性白血病患者阿糖胞苷耐药性的影响 　　[摘要] 目的 探讨异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）基因多态性对非洲人群急性白血病患者阿糖胞苷耐药性的影响。 方法 应用来自人类基因组计划（HapMap）非洲人群的细胞株培养后，给予不同浓度的阿糖胞苷（1、5、40、80 μmol/L）共培养72 h。应用alamar Blue检测细胞存活曲线、阿糖胞苷的耐药性（以更高的阿糖胞苷曲线下面积表示）。梯形法计算阿糖胞苷曲线下面积，AUC进行Log2转换后统计分析。Taqman PCR法检测非洲人群IDH1基因多态性。 结果 非洲人群中，IDH1 rr阿糖胞苷更高的曲线下面积相关 [rAA比（AC+CC），P = 0.040；r（CC+CT）比TT，P = 0.036）]。 结论 非洲人群急性白血病患者的阿糖胞苷耐药性受IDH1基因多态性影响。 　　[关键词] 异柠檬酸脱氢酶；基因多态性；阿糖胞苷；耐药性；急性白血病 　　[中图分类号] R969 [文献标识码] C [文章编号] 1673-7210（2013）10（b）-0162-03 　　急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）是一组高度异质性的恶性血液肿瘤。阿糖胞苷是治疗AML最重要的一线化疗药物，能提高患者生存率[1-2]。然而，阿糖胞苷耐药的产生一直是影响AML患者生存率的瓶颈[2]。因此，鉴定影响阿糖胞苷耐药性的关键基因的变异，对于避免阿糖胞苷耐药性的发生有重要作用。异柠檬酸脱氢酶1（isocitrate dehydrogenase1，IDH1）是近期发现的一种NADP依赖型的异柠檬酸脱氢酶[3]。研究发现，IDH1基因突变致与急性白血病的发生与不良预后密切相关[4]。然而，IDH1对非洲人群急性白血病患者阿糖胞苷耐药性的影响目前并不清楚。本研究旨在探讨IDH1对非洲人群AML患者阿糖胞苷耐药性的影响，为提高该人群AML患者阿糖胞苷的疗效，降低不良反应奠定基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 细胞培养 　　应用来自国际人类基因组计划60个非洲人（YRI）EBV病毒转化的淋巴母细胞系（lymphoblastoid cell line，LCL）。上述细胞株购自美国Coriell医学研究所。将上述细胞株置于含有L-谷氨酰胺（Lonza Walkersville，Inc.，Walkersville，MD）的RPMI 1640培养基中，加15%热灭活血清37℃，5%CO2条件下培养[5]。 　　1.2 阿糖胞苷的细胞耐药性检测 　　阿糖胞苷耐药性检测参照文献[6]方法进行。予不同浓度的阿糖胞苷（1，5，40，80 μmol/L）加入细胞中共培养72 h后，应用alamar Blue试剂盒（Biosource international，Camarillo，CA）参照制造商说明书检测细胞存活曲线、细胞增殖和细胞毒性。梯形法计算阿糖胞苷曲线下面积（AUC）判断该药的耐药性（以更高的AUC表示），AUC进行Log2转换后统计分析[6]。 　　1.3 IDH1基因多态性检测 　　DNA样本来自HapMap非洲人群的LCL细胞株。参照文献[7]，针对IDH1突变热点区域设计引物，由明尼苏达大学生物医学基因组学中心合成。引物序列如下： 　　正向：5CTCAGAGCCTTCGCTTTCTG3； 　　反向：5 TTCATACCTTGCTTAATGGGTGT3。Taqman PCR反应条件：95℃预变性7 min；然后95℃变性30 s，60℃退火35 s，72℃延伸40 s，35个循环后，70℃延伸10 min，反应产物4℃保存。反应产物经琼脂糖凝胶电泳后出现目的条带样本由明尼苏达大学生物医学基因组学中心直接测序。测序结果在美国国家生物技术信息中心（NCBI）中序列比对（BLAST）比较。 　　1.4 统计学方法 　　采用统计软件R软件对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验。连锁不平衡（linkage disequilibrium，LD）与单倍型分析、单倍型人群频率估算采用Haploview 4.2分析。IDH1 SNPs的基因型、最小等位等位基因与阿糖胞苷AUC的分析采用Kruskal-Wallis检验及Wilcox检验。以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　本研究发现，非洲人群样本中，IDH1 rr阿糖胞苷更高的AUC相关（提示耐药）。其中，IDH1 r合子AA基因型携带者阿糖胞苷的AUC明显高于rs1017393