AT1受体拮抗剂和ACEI对大鼠心肌肥厚时AT1 mRNA表达的影响.docVIP

AT1受体拮抗剂和ACEI对大鼠心肌肥厚时AT1 mRNA表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）及其受体AT1在心肌肥厚中的作用，研究DMP811（AT1受体拮抗剂）、培哚普利（ACEI）对AngⅡ诱导的心肌肥厚大鼠心肌AT1 mRNA表达水平的影响。 方法 24只6周龄的SD雄性大鼠随机分为4组：正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ+DMP811组、AngⅡ+培哚普利组，每组6只。分别皮下埋藏装有生理盐水或AngⅡ的渗透微泵。1周后观察心脏质量、心脏质量/体质量的变化，采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌AT1mRNA表达情况，并进行比较。 结果 ①输注AngⅡ 7 d不会明显影响大鼠的体质量，但可使大鼠的心脏质量、心脏质量/体质量显著增加。AngⅡ组较正常对照组心脏质量、心脏质量/体质重明显增加（P0.05）。②AngⅡ组的AT1 mRNA水平较对照组上调（84.5±3.0）%（P0.05）。 结论 心肌肥厚时AT1 mRNA的表达水平明显增加，且AngⅡ诱导了AT1 mRNA的转录上调。而AngⅡ导致的上述改变能被DMP811、培哚普利有效阻断，为以后防治心肌肥厚提供了重要依据。 　　[关键词] AT1受体拮抗剂；培哚普利；心肌肥厚 　　[中图分类号] R972 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）09（c）-0004-03 　　心肌肥厚指心脏大小、形状、质量及细胞水平的各种变化。长期的心肌肥厚很容易导致心力衰竭或猝死[1]。心肌肥厚时，尤其是室间隔的非对称性肥厚、心律失常、运动耐量受损及猝死，是一种原发于心肌的疾病[2]。分子遗传学研究表明，心肌肥厚是心肌标志蛋白表达水平升高，心肌细胞体积增大，同时伴随心脏质量增加的过程[3]。肾素-血管紧张素系统（renin angiotensin system，RAS）在引起心肌肥厚的诸因素中具有重要的作用[4]，它可以维持血压、机体内环境的稳定平衡，也调节细胞的生长、分化，尤其调控多种慢性疾病的组织改建和器官重构[5]。RAS属于循环系统激素，其中关键物质是血管紧张素Ⅱ（AngⅡ），它是重要的促心肌肥厚因子，具有强烈的收缩血管作用[6]，其亚型血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1）的活化参与了AngⅡ的大部分生物学效应。因此研究AT1发挥作用的机制及其受体拮抗剂的作用，对于了解心肌肥厚的形成，制订合理的预防和逆转措施，有着极其深远的意义。 　　1 材料与方法 　　1.1实验动物与材料 　　雄性SD大鼠24只，体重150～170 g，6～8周龄，购自重庆腾鑫生物技术有限公司，所有动物均自由饮水和摄食，并给予人性化管理。AngⅡ购自美国SIGMA公司，DMP811由美国SIGMA公司赠送，2001型微量渗透泵购自美国健康医疗仪器国际公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 动物模型的建立及分组 将24只雄性SD大鼠随机分为4组，每组6只，适应性喂养1周后，水合氯醛腹腔注射麻醉，皮下分别给予装有生理盐水或AngⅡ的渗透微泵。①正常对照组：输注生理盐水（1 μl/h）；②AngⅡ组：输注AngⅡ[200 ng/（kg·d）]；③AngⅡ+DMP811组：输注AngⅡ+DMP811管饲[3 mg/（kg·d）]；④AngⅡ+培哚普利组：AngⅡ输注+培哚普利管饲[10 mg/（kg·d）]，直至术后1周处死。 　　1.2.2 血流动力学检测 分别于手术当天、第3天、第7天测量动物的体质量（body weight，BW），术后1周断头处死大鼠，取其心脏，去掉心房及残余组织，只留下心室。并用PBS缓冲液洗净心腔残存血液之后用滤纸吸干，称重，并计算心室质量（cardioc weight，CW）与大鼠体质量之比（cardioc weight/body weight，CW/BW）。立即液氮速冻，之后存于-70℃冰箱备用。 　　1.2.2 心肌AT1 mRNA检测 实时荧光定量反转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测大鼠心肌组织AT1 mRNA：标本解冻后，立即超声破碎细胞，装于EP管并置于冰上，于4℃条件下12 000 r/min离心10 min。取上清液转移至DEPC预处理的EP管中，室温放置5 min使样本充分裂解。采用Trizol法提取心脏组织RNA，在测量仪上定量，之后于-70℃保存。电泳结果显示三条RNA条带，分别为28S、18S、5S依次清晰递减，泳道上无明显弥散痕迹，说明总RNA提取完整无明显降解，满足后续实验要求。将组织中提取的总RNA以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物反转录成cDNA