丙泊酚在正颌外科控制性降压中的脑保护作用机理.docVIP

丙泊酚在正颌外科控制性降压中的脑保护作用机理 　　[摘要]目的：通过大鼠实验，研究丙泊酚在大鼠脑缺血再灌注损伤时对线粒体通透性转换孔活性的影响程度，及其抑制神经细胞凋亡坏死的作用机制。以探讨其在正颌外科控制性降压中的脑保护作用机理。方法：选取健康雄性大鼠30只，体重250～300g，采用“双侧颈总动脉阻断法”建立前脑缺血再灌注模型，左侧侧脑室于假手术组（C组）、缺血再灌注组（I/R）组注射生理盐水1ml/kg，丙泊酚干预组（P组）射注丙泊酚1mg/kg，24h后断头提取海马组织线粒体，加入CaCl2于37℃下形成钙超载后孵育5min。电镜观察其微观组织形态学改变，采用紫外分光光度计法来观察线粒体通透性转换孔开放程度。结果：电镜下C组线粒体结构完整，排列密集；I/R组可见线粒体明显肿胀、嵴断裂、膜破裂；P组可见线粒体部分肿胀，嵴部分断裂，但损伤程度轻于I/R组。与C组相比较，I/R组和P组线粒体吸光度值明显下降（P0.05）；与I/R相比，P吸光度值下降幅度减小（P0.05）。丙泊酚组细胞肿胀坏死明显减轻，凋亡细胞及坏死细胞明显减少。结论：丙泊酚能够改善大鼠前脑缺血再灌注后线粒体形态，其机制可能与其抑制线粒体通透性转换孔（MPTP）开放有关，从而改善线粒体功能，抑制神经细胞凋亡坏死，减轻脑缺血再灌注损伤。这说明丙泊酚在正颌外科控制性降压中使用时对大脑有良好的保护作用，可以大幅度提高手术安全效果，具有重要的临床指导意义。 　　[关键词]丙泊酚；脑缺血/再灌注；线粒体通透性转换孔 　　[中图分类号]R971+.2 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）10-1072-04 　　脑缺血再灌注所造成的神经细胞损伤是各种脑血管疾病所带来的主要病例生理改变。脑缺血/再灌注后神经细胞能量代谢失衡，钙超载和自由基生成会导致线粒体通透性转换孔（Mitochondrial Permeability Transition Pore， MPTP）的开放，引起线粒体功能障碍，最终促使神经细胞死亡和神经细胞凋亡的发生[1]。丙泊酚能够抑制大鼠脑缺血再灌注后氧自由基生成和钙超载，从而发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用[2]。本实验拟观察丙泊酚对大鼠前脑缺血再灌注后MPTP的影响，进一步探讨丙泊酚在正颌外科控制性降压中使用时脑保护的作用机制。 　　1 材料和方法 　　1.1 研究对象：健康雄性Wistar大鼠30只，体重250～300g，随机分为3组（n=10）。假手术组（C）：暴露双侧颈总动脉后，左侧脑室注射生理盐水1mg/kg；缺血再灌注组（I/R）：脑缺血后左侧脑室注射生理盐水1mg/kg；异丙酚干预组（P）：脑缺血后左侧脑室注射异丙酚1mg/kg。 　　1.2 方法 　　1.2.1 采用“双侧颈总动脉阻断法”建立前脑缺血再灌注模型。4%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉后，行大鼠股动脉穿刺，置管，监测大鼠平均动脉压。放血降压至平均动脉压为（40±5）mmHg时，颈正中切口，暴露双侧颈总动脉，夹闭双侧劲总动脉10min后放开动脉夹形成再灌注。分别于缺血前，缺血后，再灌注后以及动物复苏后各时间点测量动脉血气。 　　1.2.2 将大鼠麻醉后，迅速固定于脑立体定位仪上，头皮正中切口，全部采用左侧侧脑室注射，于前囟后1mm，向左侧1.2～1.5mm处，微量注射器沿此定位孔插入3.5～4.0mm，回吸脑脊液通畅，将生理盐水或丙泊酚注射到侧脑室中，消毒缝合切口。 　　1.2.3 每组10只大鼠于再灌注24h后断头，冰台上迅速分离两侧海马组织，PBS缓冲液冲洗，匀浆后置于分离缓冲液中。线粒体的提取依Pierce试剂盒（Phermo公司，美国）说明进行。将线粒体重悬于1ml重悬液中，取适量测蛋白含量，线粒体的含量以所含蛋白量表示，依BCA蛋白浓度测定试剂盒测定。取各组海马组织的C1区固定于含0.1 mol/L二甲砷酸盐缓冲液的4%戊二醛（pH 7.4）和1%的四氧化锇中固定。经乙醇梯度脱水后，包埋于Epon 812 环氧树脂中，80 nm 超薄切片，以醋酸双氧铀-柠檬酸铅染色，透射电子显微镜观察海马组织C1区神经元超微结构的改变。紫外分光光度计法测定MPTP的开放状态。 　　1.2.4 将提取后的各组线粒体即刻置于300mmol/L蔗糖，10mmol/L Tris·HCl的重悬液中充分混匀。各组加入200μmol/L的CaCl2。整个反应体积为2ml，反应温度为37℃，即刻测定540 nm波长下5 min 内各组线粒体吸光度值的变化。以吸光度值的变化表示MPTP的开放程度，从而反应MPTP的活性。 　　1.3 统计方法：采用SPSS13.0统计分析软件进行统计学处理，各组计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间及组