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响应面法优化豆腐柴中总黄酮提取工艺 　　[摘要] 目的 研究豆腐柴中总黄酮的最佳提取工艺及其抗菌作用效果。 方法 以提取时间、料液比、乙醇浓度分数作为自变量，以豆腐柴中总黄酮（按芦丁计）的提取率作为因变量，采用响应面法优选总黄酮的最佳提取工艺，并采用紫外分光光度法测定豆腐柴中总黄酮的含量。 结果 确定最优提取工艺为提取时间为25.95 min，料液比为1∶24.05，乙醇浓度为81.89%，提取次数为3次，在此条件下，豆腐柴中总黄酮得率理论上可达0.807%。 结论 星点设计-效应响应面法优选豆腐柴中总黄酮类的提取工艺，方法简单，结果可靠。 　　[关键词] 响应面优化法；豆腐柴；总黄酮；含量测定 　　[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）06（c）-0116-04 　　豆腐柴（Premna microphylla Turcz.）又名臭黄荆、豆腐木、腐婢，为马鞭草科豆腐柴属，多年生落叶灌木植物，是一种具有营养价值和药用价值的野生植物资源[1]，含有丰富的果胶、蛋白质及多种生物活性成分[2]，其叶片果胶的含量为39.5%[3]，相关文献研究表明豆腐柴中含有果胶、蛋白质、维生素C、黄酮类、萜类和生物碱类等成分[4]。作为一种在我国分布较为广泛的药食两用的野生植物资源，重视豆腐柴资源的合理开发利用，具有重要意义。 　　近年来，从很多植物中提取出了黄酮类化合物，通过研究发现了黄酮类化合具有众多的生物学活性，如抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老和抗氧化作用[5-7]。 　　本实验采用响应面法优化超声辅助提取豆腐柴中的总黄酮，这为日后充分利用豆腐柴中总黄酮的提取与开发，提供了科学的实验依据，并有效地提取了产品得率。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　BSA-CW（全自动内校）电子天平（赛多利斯）、KQ-600DE型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）、PE lambda-35型紫外可见分光光度计（美国 Perkin Elmer公司）、R-200型旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）。 　　1.2 材料 　　豆腐柴（产地分别为：广西；江西；浙江）；对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所（批号：10080-200707），石油醚，无水乙醇，乙醚均为分析纯（广州化学试剂厂）。 　　2 方法 　　2.1 总黄酮的提取 　　将不同产地阴干的豆腐柴全草粉碎，过100目筛，加一定倍量石油醚超声脱脂2次，滤渣烘干，备用。准确称取已粉碎过筛的2.0 g豆腐柴粉末置于50 mL锥形瓶中，以一定料液比例加入一定浓度乙醇溶液，浸泡过夜。在室温下，以50 kHz频率超声提取一定时间，取提取液于1000 r/min条件下离心，沉淀以同样条件提取和离心，合并3次上清，置于100 mL容量瓶中，然后用对应浓度乙醇定容至刻度，得总黄酮提取液，待用。 　　取不同产地豆腐柴总黄酮提取溶液10 mL，置于50 mL容量瓶中，加60 %乙醇至15 mL，各加5% 亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，放置5 min，加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，加1 mol/L氢氧化钠溶液2 mL，用60% 乙醇定容至刻度，摇匀，静置15 min，以未加总黄酮提取液的试管为空白，在504 nm处测定吸光值。 　　2.2 芦丁标准曲线的制作 　　精密称取芦丁8.62 mg置于50 mL容量瓶中，用60% 乙醇定容至50 mL，制成0.1724 mg/mL的芦丁标准液，作对照品。分别取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL芦丁标准液，相当于含有0.0000、0.3448、0.6896、1.0344、1.3792、1.7241 mg芦丁，置于50 mL容量瓶中，加60%乙醇至15 mL，各加入5%亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，放置5 min，加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min，加1 mol/L NaOH溶液2 mL，用60%乙醇定容至刻度，摇匀，静置15 min，以0管为空白，在504 nm处测定吸光度。以芦丁标准液浓度为横坐标（X）吸光度为纵坐标（Y），绘制标准曲线，标准曲线方程为Y = 8.673X + 0.0837，r = 0.9976，线性关系良好。 　　2.3 样品中总黄酮的含量测定方法 　　P%=[C×V1×（V2/V3）]/M×100% 注：式中P为总黄酮的提取率（%），C为从回归方程计算求得样品溶液的浓度（mg/mL），V1为样品溶液定容体积（mL），V2为提取液定容体积（mL），V3为取样溶液体积（mL），M为豆腐柴粉末质量（mg）。 　　2.4 响应面法优化总黄酮最佳提取工艺 　　根据前期试验基础及参考相关文献，本研究确定超