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正交试验优选黄芪有效成分的提取工艺 　　【摘要】 目的：优选黄芪有效成分的提取工艺。方法：采用正交试验L9（34）优化提取工艺，以乙醇体积分数醇度、乙醇溶剂用量、提取时间、提取次数为考察因素，以主要有效成分黄芪甲苷，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的提取率为指标。结果：最佳工艺为用10倍量80%乙醇，回流提取2次，每次1 h。结论：优选的工艺稳定、合理，可用于黄芪有效成分的提取及质量控制方法标准。 　　【关键词】 黄芪； 黄芪甲苷； 毛蕊异黄酮葡萄糖苷； 正交试验； 提取工艺 　　黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.） Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌之功效，临床应用广泛，为常用补气中药，其有效成分具有明确的药效作用等[1-2]。按中国药典2010年版一部规定的质量考察标准，需进行主要指标成分：黄芪甲苷，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的测定[3]。但相关测定研究方法仍存在一些不足[4]。同时研究提高不同黄芪有效成分提取率的方法也在不断开展，如纤维素酶提取法、微波提取工艺法、超微粉碎提取方法等[5-7]。在本项实验研究中笔者采用了正交试验法进行了相关研究并取得一定的研究结果，现介绍如下。 　　1 材料 　　1.1 仪器 Aglient 1200 HPLC-DAD液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；sartorius OSA-22电子分析天平；DZKW-4型电热恒温水浴锅等。 　　1.2 药材及试剂 黄芪，购自北京，产地内蒙古，经鉴定为规定品种的中药饮片，符合中国药典2010年版一部规定[3]。黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110781-200613），毛蕊异黄酮葡萄糖苷（中国食品药品检定研究院，批号：101030-200510）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 黄芪甲苷的含量测定 色谱条件：色谱柱Aglient TC-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；Ser#USJBB01065；流动相：乙腈-水（32：68）；流速：1.0 ml/min；柱温：25 ℃；蒸发光散射：温度105 ℃，气流量2.8 L/min，空气泵压力0.5 mPa（0.45～0.56 mPa），柱压75～77 bar，进样量：10 μl。 　　对照品溶液的制备：精密称取10 mg黄芪甲苷对照品，用甲醇将其溶解，并定容到25 ml，即得。供试品溶液的制备：精密称取黄芪4 g（粉碎，过40目筛），置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收溶剂至干，残渣加水10 ml，微热溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解定容到10 ml，进样测定。 　　2.2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定 色谱条件：色谱柱：Agilent TC-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；Ser#USJBB01065；流动相：乙腈-0.2%甲酸梯度洗脱，见表1；流速1 ml/min；检测波长260 nm。 　　对照品溶液的制备：精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷5 mg，用甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，即可。供试品溶液的制备：精密称取黄芪粉末1 g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50 ml，称重，加热回流4 h，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，进样测定。 　　2.3 正交试验优选提取工艺 　　2.3.1 单因素考察溶剂对提取工艺的影响 提取一：取黄芪500 g，用10倍量60%乙醇回流提取1 h，提取1次，醇提液浓缩至约1100 ml，喷雾干燥，得粉末85.2 g。提取二：取黄芪500 g，用10倍量80%乙醇回流提取1 h，提取1次，醇提液浓缩至约680 ml，喷雾干燥，得粉末62.8 g。 　　黄芪甲苷的测定：供试液的制备：取1 g黄芪醇提物粉末，加水10 ml加热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 ml，弃去氨液，蒸干正丁醇层，残渣加甲醇定容到5 ml。HPLC测定法同前，黄芪甲苷含量见表2。 　　结果显示，乙醇醇度对黄芪中皂苷的提取影响较大，采用80%乙醇提取时，黄芪皂苷的提取效果最佳，故应采用80%乙醇条件提取黄芪。 　　2.3