HPLC---基线漂移的各种问题及解决的方法.docx

HPLC－基线漂移的各种问题及解决的方法原因 解决方法 1 柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。） 1.1控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图 2 流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。） 2.1使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。 3 流通池被污染或有气体 3.1用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸） 4 检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线） 4.1取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。 5 流动相配比不当或流速变化 5.1更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。 6 柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 6.1用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。 7 流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 7.1检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂 8 样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。 8.1使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。 9 使用循环溶剂，但检测器未调整。 9.1重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。 10 检测器没有设定在最大吸收波长处。 10.1将波长调整至最大吸收波长处 基线噪音（规则的） 原因 解决方法 1、在流动相、检测器或泵中有空气 1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。 2、漏液 。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。 3、流动相混合不完全 。用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 4、温度影响（柱温过高，检测器未加热） 4、减少差异或加上热交换器 5、在同一条线上有其他电子设备 5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。 6、泵振动 。在系统中加入脉冲阻尼器 基线噪音（不规则的） 原因 解决方法 1、漏液 图 1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。 2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 2、检查流动相的组成。 3、流动相各溶剂不相溶 3、选择互溶的流动相 4、检测器/记录仪电子元件的问题 4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。 5、系统内有气泡 5、用强极性溶液清洗系统 6、检测器内有气泡 6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器 7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。） 7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池 8、检测器灯能量不足 8、更换灯 9、色谱柱填料流失或阻塞 9、更换色谱柱 10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常 10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置O、宽峰　原因 解决方法1、流动相组成变化 1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低 2、调节流速3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。4、检测器设定不正确 4、调整设定5、柱外效应影响 a、柱子过载 图b、检测器对反应时间或池体积响应过大　c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大　d、记录仪响应时间太长　5、 a、 小体积进样(例如：10ul而不是100ul)以1：10或1：100的比例稀释样品　b、减少响应时间或使用更小的流通池　c、 使用内径为0.007-0.01的短管路　d、减少响应时间　6、缓冲液浓度太低 6、增加浓度　7、保护柱污染或失效 7、更换保护柱　8、色谱柱污染或失效，塔板数较低　8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。　9、柱入口塌陷 9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子　10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰　10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果　11、柱温过低 11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃　12、检测器时间常数太大 12、使用较小的时间常数　P、分离度降低　原因 解决方法　1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)　1、重新配置流动相　2、保护柱或分析柱阻塞图 2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。　Q、所有的峰面积都太小　原因 解决方法　1、检测器衰减设定过