三色堇花药培养技术研究.doc-杭州农业科技信息网.docVIP

三色堇花药培养技术研究初探 刘辉1，傅巧娟1，陈一1 （1杭州市农业科学研究院 园艺研究所，浙江 杭州 310024） 摘要：研究了三色堇花蕾消毒方法、花蕾低温预处理和不同培养基组分对花药愈伤组织诱导率及其分化的影响。结果表明，采用0.1% HgCl2灭菌20 min是三色堇花蕾较为理想的表面灭菌时间。基因型不同花药愈伤组织的诱导率也不尽相同，而且愈伤组织的诱导率总体不高。选择合适的培养基组分、激素种类及其配比以及合适的培养条件可能是影响三色堇花药培养成功的关键因子。 关键词：三色堇；花药；组织培养 Elementary Study on Anther Culture of Pansy (Viola×wittrockiana) LIU Hui*1,, FU Qiao-juan1,CHEN Yi1, (Department of Horticulture,Hangzhou Academy of Agricultural Sciences,Hangzhou 310024,China) Abstract: Pansy (Viola×wittrockiana),a bedding plant is used widely in landscape in China.The effects of different ways of bud sterilization,bud cold pretreatment, different combinations of plant growth regulators on callus induction rate of anther and plant regeneration of Pansy were investigated.The results showed that 20 min with 0.1% HgCl2 was a ideal bud surface sterilization time,and obvious difference was detected between two genotypes in their effect on callus initiation of anther,but the overall rate of callus induction was not high.It may be suggested that the kind and concentration of hormones and culture conditions should be key factors for successful anther culture of pansy. Key words:Pansy;Anther;Tissue Culture; 三色堇又名蝴蝶花、猫儿脸，属堇菜科、堇菜属多年生草本植物，因其色彩丰富艳丽、品种繁多、花色多变、花期长、适应性强，是当前我国优良的重要花坛绿化草花。另外，三色堇较耐低温，可耐零下15 ℃低温，在昼温15-25℃、夜温3-5 ℃条件下植株发育良好，因此也是我国冬、春季节不可多得的重要花坛绿化草花。由于三色堇具有明显的杂种优势，观赏性强，目前市面上销售的三色堇种子多为F1代。利用杂交优势进行杂交育种的关键是获得优良性状的纯系父母本（自交系）。为了获得自交系，按常规的自交方法，需要耗费大量的田间土地、时间和劳力,一般需要5-6年的时间，而且手续十分繁琐，最终的纯度也不够理想。而采用花药培养获得单倍体再加倍的方法，只需1年时间就可以获得和多代自交效果相同的纯系，可以极大地缩短杂交育种年限，提高育种效率。 本试验研究了三色堇花药培养的技术和条件，初步探讨了影响三色堇花药组织培养的因素，以期最终获得单倍体植株,在较短的时间内培育出三色堇育种亲本。 1 材料与方法 1.1 材料 选用生产上常用的两个三色堇品种：清新绯红和想象力紫色，种子由浙江虹越花卉有限公司提供。 三色堇于2009年9月中旬种植在杭州农科院园艺所实验基地,于2010年3月上旬开始采集三色堇花蕾进行研究。根据杨宏光[1]等对三色堇小孢子发育时期与花器形态相关性分析的研究，选取纵径长度14－15mm与横径在3－5mm的花蕾，此时期的花蕾多处于单核靠边期。 1.2 花蕾消毒方法研究：将选好的花蕾放在自来水下冲洗5 min，再用蒸馏水冲洗3次后用吸水纸吸干水分。在超净工作台上，用75%的酒精消毒1 min，再用无菌蒸溜水冲洗3次后用0.1% HgCl2进行消毒，消毒时间设为10、15、20、25和30 min。消毒完后用无菌蒸溜水冲洗4次，然后接种在Nitsch1培养基上，培养室温度25±1℃，暗培养。每一处理10瓶，每瓶接种6个花蕾，接种7 d后统计一次污染率