细胞显微操作技术.pptx.pptVIP

一、目的要求 练习针刺细胞（未受精卵、去卵核、早期胚胎细胞或体外培养细胞） 练习微吸管制备； 了解显微移植技术（细胞核、外源基因） 二、原理 采用显微操作系统（倒置显微镜/体视显微镜+显微操作器）将供体物（基因、细胞核或细胞其他成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、胚胎细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能或者获得转基因动物的技术。 实验四 细胞显微操作技术 显微操作仪 供体细胞的细胞核移入卵母细胞后，在卵母细胞相关因子的作用下，发生了重编程回复到发育的起点状态。 核重编程的过程就是使在体细胞中被关闭，而在正常胚胎发育中表达的基因重新被激活的过程 重编程有三种可能的结果 （1）供核基因组完全没有进行重编程，重构胚很快死亡； （2）部分重编程，重构胚在不同的发育阶段死亡 ； （3）完全重编程，产生正常的克隆动物。 核移植的机理 多莉的诞生过程 利用显微操作系统将外源目的基因（DNA或RNA）直接注入到受体细胞或受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，培养/筛选，获得转基因动物/性状分析； 显微注射是目前基因转移效率较好的一种基因转移方法，可直接用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基因的长度不受限制, 可达100kb；实验周期相对比较短。它的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂；导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致