免疫印迹法的实验技术精选.pptVIP

免疫印迹法的实验技术（Western Blot 印迹方法） 一、Western-Blot简介 Western Blot，又称为免疫印迹（Immunoblot）,是70年代末80年代初发展起来的蛋白质测定技术。 蛋白质印迹的发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克（George Stark）。在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为Western Blot。 印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 Western Blot 印迹方法，是检测蛋白质混合液体中某种特定目的蛋白的定性方法，也可作为确定同一种蛋白质在不同细胞或者同一种细胞不同条件下的相对含量的半定量方法。 实验主要内容： 实验原理 将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶 【SDS-polyacrylamide gel electrophoresis SDS)】电泳使蛋白质按分子量的大小进行分离 → 凝胶上分离到的蛋白质转移至固相支持物（硝酸纤维素膜或PVDF 膜）上 → 用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合→与经辣根过氧化物酶标记（偶联）的二抗结合 →用ECL发光或DAB显色检测。如果转印膜上含有靶蛋白，经DAB显