2沉淀反应要点.ppt

* 实验二 沉淀反应 一、实验内容 1、双向琼脂扩散试验(小组做) 2、单向琼脂扩散试验(示教) 3、火箭电泳(示教) 4、免疫电泳(示教) 5、尿液HCG检测(胶体金法) (小组做) 免疫标记技术 沉淀反应 二、目的与要求 1、掌握单扩、双扩基本原理、方法、结果分析及应用； 2、了解火箭电泳基本原理及方法； 3、熟悉免疫电泳基本原理及应用; 4、了解胶体金法检测HCG的原理、方法。 三、讲解内容 (一)沉淀反应的定义 指可溶性Ag与相应Ab在一定条件下发生特异性结合，出现肉眼可见的沉淀物的反应(precipitation)。 可溶性Ag——沉淀原； 相应Ab——沉淀素。 (二)沉淀反应的类型 免疫扩散：在琼脂中进行扩散 单向免疫扩散、双向免疫扩散、 火箭电泳、免疫电泳等。 免疫比浊 1、双向琼脂扩散试验 原理：琼脂凝胶是一种半固体胶状物，里面有无数小孔，Ag、Ab在孔中顺浓度差进行自由扩散，在比例适合处形成沉淀线，即为阳性反应。 用途： 定性或定量测Ag、Ab;分析两种抗原间的关系。 (1)材料： A、待测Ag: 患者血清； B、阳性对照: AFP阳性血清； C、已知抗体: 兔抗人AFP。 AFP检测 (2)方法： A、琼脂反应板制备； B、打孔； C、加样； D、反应(湿盒370C 24h); E、结果分析。 (3)用途：抗原或抗体的检测，可粗略定量。 1.1:32与1:16相吻合 1:16与1:8相吻合 1:8与AFP(+)相吻合 标本中抗原为AFP抗原 2.1:32有沉淀线 1:64无沉淀线 标本中抗原滴度为1:32 (5) 注意事项： A、打孔不要划破边缘； B、加样要求：满而不溢； C、反应时间为24h； D、合理分配吸管。 3、单向琼脂扩散试验 用途：定量测抗原. 5、火箭电泳 用途：已知抗体测抗原，定量实验； 火箭电泳＝单向琼脂扩散＋电场 6、免疫电泳 先电泳，后扩散。 免疫电泳的用途： A、用于某种蛋白缺乏的疾病的诊断； B、用于抗原纯度分析。 (三)胶体金法检测尿液HCG 人绒毛膜促性腺激素 (human chorionic gonadotropin, HCG) 在胚胎的发育过程中，胎盘合体滋养层细胞产生大量的HCG，在孕妇尿液中可检测到。 用特异性抗体（抗HCG），检测尿液中的HCG，辅助早孕诊断。 胶体金标记免疫技术 (金标法) 胶体金是由氯化金与还原剂反应形成的一种胶体颗粒，具有吸附蛋白质的特性(可以标记Ag或Ab)； 胶体金颗粒具有呈色性，中等大小的胶体金颗粒呈现酒红色。 胶体金标记免疫技术是将金颗粒光学检测的灵敏性和抗原抗体反应的特异性相结合。 胶体金法检测尿液HCG，采用的是斑点免疫层析法。 其试验原理为： 以NC膜为载体，利用微孔膜的毛细管作用， 使膜条一端的液体缓慢向另一端渗透； 在移动的过程中，被检测物与预先固定在NC 膜上的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则 越过该区域而被分离。 通过胶体金出现呈色带判断结果 A G T B 层析流方向 HCG金标试纸 A：加待检尿液 G：金标鼠抗人HCG单抗 T：鼠抗人HCG单抗 C：羊抗鼠IgG抗体 B：吸水纸 滴加标本 C *