T细胞检测技术2013要素.pptVIP

T细胞检测技术 机体接受外来抗原及自身抗原刺激后，通过细胞免疫和体液免疫及相关系统协同作用，对抗原产生应答。 T 细胞应答： T细胞增殖 分泌细胞因子 细胞毒效应 表达特定表面标志 淋巴细胞 DNA合成 分化 母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松 一、淋巴细胞增殖实验 1、原理 （1）形态学检测 2、检测方法 方法学评价 优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。 缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。 （2）3H-TdR掺入法（MTT法） PHA 淋巴细胞（54h） 3HTdR掺入 （MTT被还原） 收集细胞，检测β射线（490nm吸光度） 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。 原理： CFSE等染料可连结到细胞内蛋白的氨基酸群（PKH26能插入脂膜），并随细胞分裂而分配到子代细胞中，每分裂一次，荧光强度减少一倍。 方法学评价 优点：操作简单；重复性强；安全； 缺点：CFSE可能干扰细胞增殖 （3）C