《大肠杆菌测定.pptVIP

检测方法 MPN:最大可能数的简称.表示样品中活菌的密度.是用概率论来推算样品中菌数近似的数值. 常用的单位: 涂抹大肠实验------MPN/100cm2 液体大肠实验------MPN/100ml 固体大肠实验------MPN/100g 大肠空白没有单位,不用出结果 大肠菌群检验步骤 大肠菌群的检验步骤为检样稀释.依据国标 检样稀释 初发酵(乳糖发酵) 五步 分离培养 证实实验(复发酵) 结果报告 大肠菌群检测流程图 A.检样稀释 1)---以无菌操作将检样25g/ml接种在装有 225ml灭菌生理的盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内.充分混合,制成1:10的均匀稀 (2)---用1ml灭菌吸管,吸取1:10稀释液注人含有9ml灭菌生理的盐水或其它稀释液的灭菌试管内,混匀,制成1:100稀释液 无菌取样 样液稀释 B.初发酵(通常说的假定试验,目的在于检查样品中有无发酵产气的细菌) C.分离培养 将产气的样品接种伊红美兰培养基上,36±1OC培养箱内培养,18±24h 观察菌落形态,并做革兰氏染色证实实验 菌落形态:①深紫黑色,具有金属光泽的菌落 ②紫黑色,不代或略带金属光泽的 菌落 ③淡紫黑色,中心色较深的菌落 (可疑菌落)粉红色,中心色无较深的菌落 倒平板 菌落类型 D.证实实验(复发酵) 在上述平板上,挑选典型菌落接种在乳糖发酵管中,置36±1oc培养箱内,培养24±2h,观察产气情况. 凡乳糖产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告为大肠菌群阳性. 注意事项 (1).初发酵和证实试验:乳糖发酵实验系样品发酵,不是纯菌的发酵实验,所以初发酵阳性并不代表大肠菌群阳性,因此,必须做进一步证实实验. (2).产气量与倒气管: ① 用于初发酵或复发 酵的导气管内应无气泡, 作空 白对照 ②应以产气为主,产酸仅作参考 ③导气管口被样品颗粒封住,影响结果 3)挑选菌落:在平板呈黑色,有或无金属光泽,检出率最高,粉红色,粉色检出率最低.只挑选一个菌落影响大肠菌群的检出率,当菌落不典型时,应挑选2~3个菌落作证实试验,以免出现假阴性. (4) MPN检索表:本表采用3个稀释度,即1ml(g),0.1ml(g), 0.01ml(g) 若改用10ml(g),1ml(g), 0.1ml(g)时,表内数字应相应降低10倍. 若改用0.1ml(g),0.01ml(g), 0.001ml(g)时,表内数字应相应增加10倍. 快速测定方法 最可能数法 平板法 最可能数（MPN)法 原理：大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶。分解液体培养集中的酶底物MUGal,使4-甲基伞形酮游离，在336nm的紫外光灯下呈现蓝色荧光。可根据产生状况结合MPN表对大肠菌群进行测定 平板法 原理：大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶。分解液体培养集中的酶底物 Aliz-gal ，使茜素有了并与固体培养基中的铝 铁 钾 铵离子结合形成紫色（或红色）络合物，使菌落呈现相应颜色 计数 当平板上的紫色（或红色）菌落不高于150个，且其中至少有一个平板紫色（或红色)菌落不少于15个则可按下式计数 快速测定流程 其他检验方法 LTSE快速检测法 疏水网膜法 TTC显色法 DC(去氧胆酸法)半固体试管法 纸片法 显色荧光法 PCR法 * 大肠菌群的测定 大肠菌群:一群能发酵乳糖,产酸产气,需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌. 分布：分布较广，多存于温血动物粪便，人类粪便中或者被其污染的地方 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 测量意义：该菌源于粪便,故以此作为粪便污染指