waters高效液相色谱.doc

Waters高效液相色谱操作说明 简介 本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze图谱处理软件）+流动相 操作流程 0.准备工作 确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误 1.开机 打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。待程序完全启动，整个开机过程结束。系统默认进入上次使用的方案。 2.建立新方法和新方案 2.1新建方案 方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。 2.1.1创建步骤 选择→单击→单击next→在project name中输入方案名称（如abc），comments中可填注释，也可不填。→单击finish 2.1.2打开创建的方案 在界面下→单击→在project中找到你创建的方案（如abc）→点击OK,即进入到我们自己的方案中了 2.2新建方法 在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。试验方法主要设定的包括洗脱方式，检测波长等参数。 2.2.1新建方法步骤 单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel 1选项卡）→在wavelength框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc 1）→单击save3 2.2.2洗脱方式的设定（重要） 在programmed flow中可看到。其中Isocratic为等度洗脱，Gradient为梯度洗脱。以下我们来分述。 2.2.2.1若你用等度时（Isocratic）：pump mode中选择Isocratic 表格中Isocratic Flow A为流动相A的流速,Isocratic Flow B为流动相B的流速，Total Flow为总流速。 例如：假设方法要求用乙腈做A相，用纯水做B相，乙腈占70%，水占30%，等度，则： 2.2.2.2若你用梯度时（Gradient）：pump mode中选择Gradient 表格中第1行默认已有，单击下面空白行处添加新行。 Time为时间，即此行开始时间；Flow不作更改，保持1ml/min的总流速； %A处填A相比例；%B处填B相比例；curve处为曲线型号，一般不变。 例如：假设用方法要求乙腈做A相，用纯水做B相，0—10min乙腈从100%到50%；10—30min乙腈从50%到40%；30—60min乙腈从40%到80%；则： 洗脱设置完毕继续按照2.2.1完成方案的创建。 3.洗泵和平衡 方法设定完毕，我们还要进行洗泵与平衡两项工作，让机器做好进样前的准备。 3.1洗泵 在更换流动相，第一次使用机器，长时间未使用的情况下需要进行洗泵的工作。步骤如下：单击（purge pump）→next→按指示图操作：打开泵面板，取塑料注射器，扭开排液阀旋钮，用注射器抽取泵中液体10ml左右（无气泡即可），反向扭紧旋钮，取出注射器。根据需要灌洗AB泵。单击next→按图示操作：向左打开参比阀，单击next→（即是对AB泵以默认的5mi/min的流速进行冲洗，若只充一个泵，只选一个即可。）默认冲洗时间5min，5min后自动停止，向右关紧参比阀→finish结束洗泵 3.2平衡 洗完泵后，还要将色谱柱内杂质洗净。所以我们需要进行平衡。在每次进样前，我们都必须洗平衡。步骤如下：单击(equilibrate)→在弹出的对话框选择所需方法（一般为你的实验方法，如abc1）→待基线稳定，且达到小数点后5位数字4的时候，即可停止洗平衡（一般十几钟到几十分钟不等）→(abort) 4.进样 平衡好之后，即可进样（请先将注射器中样品准备好5）进样步骤如下：单击(single injetion)→在出现的对话框中输入进样名称，方法，进样体积（一般为10ul），时间等内容，例如设置好之后→单击inject按钮→等到操作动画出现时，将进样环手柄搬到load位置，平稳插入微量注射器，均匀恒速注入样品液，除另有规定外，不应立即取下注射器，手柄搬到inject位置，即开始出现图像→点击(send date to review)出现大视图→等到样品跑结束，自动出现结果图。（中途可以按中止(abort)停