流式细胞术(言)解析.pptVIP

样品染色步骤 PBS洗细胞1~2次 加（荧光）单抗，暗处孵育15~30分钟 如果必需，加荧光二抗，暗处孵育15~30分钟 PBS洗细胞一次 过300目尼龙网 上机检测 细胞周期分析 细胞凋亡—Annexin V 细胞周期分析——PI单染 PI单染测细胞凋亡步骤 制备细胞悬液 PBS洗细胞1次，1000rpm离心10min，去上清。 加PI染液（含PI 50mg/ml, Rnase 50ug/ml)，暗处孵育30分钟 过300目尼龙网 上机检测 细胞凋亡—PI加Annexin V双染 单参数直方图 双参数直方图:点图 二维等高图 假三维等高图 三参数直方图 多参数分析 直分析方图 设门分析:REGION和GATE设置 二、数据显示方式 由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 （一）单参数直方图 单参数直方图 细胞相对数量 信道(channel ) 双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。 双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 （二）双参数直方图 1.双参数直方图点图 绿色荧光强度 红色荧光强度 双参数直方图点图 中性粒细胞 单