04 实验四 elisa.pptVIP

实验五 酶联免疫吸附实验 免疫酶技术 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物，与抗体（或抗原）联结，与相应的抗原（或抗体）作用后，通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量，亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究，即酶免疫组织化学技术。 目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验（ELISA）。 间接法比直接法灵敏 由于结合在抗原—抗体复合物上的荧光抗体显著多于直接法，从而提高了敏感性。如细胞抗原上每个分子结合3～5个分子抗体，当此抗体作为抗原时又可结合3—5分子的荧光抗体，所以和直接法相比荧光亮度可增强3或4倍。此法除灵敏性高外，它只需要制备一种种属间接荧光抗体，可以适用于多种第一抗体的标记显示，这是现在最广泛应用的技术。 一 、ELISA法间接法检测血清中HBsAb 【实验目的】 　　1．熟悉ELISA的原理。 　　2．了解免疫标记技术的原理。 【实验原理】 　　采用纯化HBsAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP。 当标本中存在HBsAb时，就会形成HBsAg-HBsAb-HBsAg-HRP复合物，加入TMB(四甲基联苯胺 )底物产生显色反应，反之就无显色反应。 加入酶复合物， (HBsAg-HRP),酶复合物与表面抗体结合 加入酶的底物，酶与底物反应，显色 二、ELISA间接法检测血清中HB