2015-10-19--第三章—蛋白质研究技术-1.pptVIP

提纲 一、蛋白质的理化性质（略讲） 二、蛋白质的研究技术 三、蛋白质的分类（不讲） 原料是基础--膜 选择种类 NC PVDF 尼龙膜 选择标准 a.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜能结合蛋白的载量），以及膜的孔径（也就是拦截蛋白的大小）； b.不影响后续的显色检测（也就是适合用于所选的显色方法，信噪比好）； c. 后继实验有其他要求，比如要做蛋白测序或者质谱分析，还要根据不同目的来挑选不同的转移膜 抗体的选择 作为western来讲，理论上单抗比多抗的特异性要好，但单抗种类较少一般价格偏高，所以一般来说多抗足够了。用于western的抗体和用于ELISA的抗体，一般来说用于western的抗体识别的是氨基酸序列特异性；而可用于ELISA的抗体则要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构象特异性。所以一般根据抗体说明书来确定。 做免疫印迹时选择抗体主要应考虑两个问题，一是所选抗体是否能识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白，另一个是所选抗体是否会引起交叉反应条带。 八仙过海，各“显”神通--显色方法 同位素法 灵敏度高、不安全、环境污染、不方便和半衰期短 ? 荧光底物法 Krypton ?荧光底物 Further Readings 生物秀Western Blotting专题 /special/experiment/Western