基因工程1..pptVIP

第一节 引言 单拷贝基因：编码多肽，通常每单倍体基因组仅1-2拷贝； 多拷贝基因：如tRNA、rRNA及组蛋白基因； 基因家族(multigene families)：编码产物具有类似的结构和功能，可能有同一基因突变而来。 启动子 原 核 数十bp，紧邻基因5’外侧 多顺反子(polycistron) 真 核 分子量大，可距基因数kb 单顺反子(monocistron) 第二节 基因的现代概念 1 移动基因(movable gene) 又称为转位因子(transpoable elements)、跳跃基因(jumping genes) 分为：插入序列(insertion sequence, IS), 2000bp 转座子(transposon, Tn), 2000bp 噬菌体Mu和D108 第二节 基因的现代概念 IS因子：是在细菌中首先发现的最 简单的一类转位因子，其 末端均具有一段反向重复 序列（IR） IR IR 转位酶基因 IS因子的形体图 第二节 基因的现代概念 转座子：由几个基因组成的特定的DNA片段，常带有抗生素抗性 基因，所以易于鉴定，分为复合系和Tn3系。 A 反向重复 B 同向重复 侧翼IS因子取向不同的两种复合转位子 中间分离区 IR序列：38bp β -Lac：B-内酰氨酶基因（APr） TnpA：编码1015个氨基酸的转位酶 TnpR：编码185个氨基酸蛋白质（抑制 TnpA基因的合成活性；促进中间分 离区发生位点特异切割） Tn3系转位子的形体图 IR TnpA TnpR β -Lac IR 第二节 基因的现代概念 2 断裂基因(split gene) 第二节 基因的现代概念 3 假基因(psuodogene) 1977年G.Jacq等首次提出，指一种核苷酸序列与相对应的功能基因基本相同，但不能合成出功能蛋白的失活基因。如人α-珠蛋白及β-珠蛋白基因簇，金属硫蛋白。 第二节 基因的现代概念 4 重复序列及重复基因(repeated gene) 不重复的唯一序列（仅1拷贝）：约70%，1kb左右； 低度重复序列（拷贝数10）：各序列基因产物氨基酸稍异； 中度重复序列（拷贝数10-几百）：组蛋白、rRNA、tRNA基因 高度重复序列（拷贝数几百-几万）：卫星DNA的简单重复序列， 高丰度SINE(short interpersed elements，短散在序 列)的Alu序列包括与染色体结构特征有关的序列，如着丝粒、端粒和染色钮； A：端粒 B：着丝粒 C：染色钮 染色体中重复序列基元进行荧光原位杂交(FISH)定位。 第二节 基因的现代概念 1977年英国人F. Sanger)在测定φ X174噬菌体DNA序列时发现，共5387个核苷酸，编码10个蛋白质。重叠类型有：一个基因完全在另一个基因中；两个基因末端的密码子重叠。 此外，C. Shaw和J. E. Walker还发现了三重叠基因。重叠基因主要在细菌、噬菌体、病毒等一些低等生物中。一些真核生物还发现了另一类重叠基因： 一个基因存在与另一个基因的intron，如果蝇的蛹角质膜蛋白基因；以基因相反链编码的嵌套基因。 5 重叠基因(overlapping gene或嵌套nested) 第三节 基因工程的诞生及主要研究内容 1 基因工程的诞生 核酸限制性内切酶：1972年H. Y. Boyer发现EcoRI位点GAATTC； DNA连接酶：1970年H. G. Khorana发现T4ligase; 基因克隆载体：如pBR322, pUC13等； 外源DNA分子导入细菌细胞：1972年S. Cohen采用CaCl2法将质粒导入大肠杆菌； DNA体外重组：P.B