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细胞与分子免疫学杂志 1997;13(1):68-72 Journal of Cellular and Molecular Immunology 鼠单克隆抗体人源化 袁清安 俞炜源 黄翠芬 (军事医学科学院生物工程研究所,北京 100071) 　 提 要 鼠源性单克隆抗体应用于临床由于HAMA反应的存在而受到阻碍。以CDR移植为核心,以同源分析及分子模建为辅助设计的人源化方案，已成为克服HAMA反应的主要手段。本文结合单克隆抗体人源化的最新进展对该领域的工作作一综述。 关键词 人源化 CDR移植 分子模建 HAMA 单克隆抗体 抗体是免疫系统中最重要的分子,在临床上有极大的应用价值。其立体结构组成与功能关系表明，不同的结构模块(CH1、CH2、CH3、VL、VH)在空间和折叠上相对独立,对应着不同的功能。抗体的效应功能由Fc引发，特异性和高亲和性由Fv决定。大量的抗体一级结构序列和越来越多的抗体立体结构数据分析表明,Fv在空间结构上十分保守,但人、鼠间有差异的框架区(FR)、空间构象及序列各由有差别的6个互补决定区(CDR)组成。CDR上有直接的抗原接触位点,FR是Fv最主要的抗原性决定区,是引起人抗鼠抗体(HAMA)反应的主要部分,在异种间可引起抗个体型抗体。 1 鼠源单克隆抗体的临床应用与问题 以细胞融合为基础的鼠杂交瘤技术的发展，使得人们能够大量获取高亲和性和强特异性的鼠单克隆抗体(McAb),它们在临床上有多方面的潜在应用[1]。 1.1 感染性疾病 抗体提供的被动免疫,消除了病原体的致病能力: 仅仅是Fab与抗原的结合，足以中和很多毒素与病毒的毒力；Fc与相应受体结合，可引发包括ADCC在内的诸多效应功能。 1.2 体内定位诊断 同位素标记的McAb或Fab在病灶的定位造影,对确诊及手术有很大帮助,已用于心血管、原发癌及转移癌等疾病的定位诊断。 1.3 免疫调节 在免疫活化方面,双特异性的抗体将效应细胞表面的信号转导分子和病变细胞表面的抗原分子交联,便可活化效应细胞,使之发挥免疫功能；在免疫抑制方面,抗受体抗体可封闭受体,阻断效应细胞活化的路径。因受体分子的分布而引起普遍性的或选择性的免疫抑制,在移植排斥和自身免疫等疾病的治疗上有广阔的前景。 1.4 肿瘤治疗 肿瘤特异抗原或相关抗原的抗体可作为导向分子,将效应细胞(如Tc)和免疫活化因子(如IL-2)富集于肿瘤组织周围,发挥它们的杀伤作用；小分子抗体导向的免疫毒素可渗透到实体肿瘤中,对癌细胞进行有效杀伤；自分泌生长型的肿瘤可用抗生长因子抗体或抗受体抗体进行竞争抑制,减缓肿瘤的生长。 McAb在临床上还有其他方面的应用,有待于进一步的开发。其中很有意义的是血栓病的治疗。将抗血小板抗体或抗纤维蛋白抗体与溶栓活性分子偶联或融合,作成用量少、见效快的新型溶栓导向药物,已有多种应用于临床试验。 不幸的是McAb应用于人体存在着严重的缺陷[2]: 血清中半寿期短；仅有部分不同亚类的抗体能引发效应功能；最大的障碍是诱发HAMA反应。McAb诱导的内源性抗体基本上可分两类[1]:抗个体型(anti-idiotype)和抗同种型(anti-isotype)。前者通过中和抗原结合位点而消除了McAb的能力;后者除了加速McAb的清除外,还会在诊断时引起假阳性,还可能引起过敏性休克。除非这些问题被解决,大剂量及多次给病人使用McAb是不可能的。目前克服这一困难的首选途径是鼠McAb的人源化。 2 鼠McAb人源化的原则和策略 使用人源抗体或人源化抗体是克服HAMA反应的两种可能的方法。由于特异性强、亲和力高的人源抗体的基因不易得到,目前主要进行鼠McAb的人源化。鼠McAb的人源化,就是为克服鼠源McAb的免疫原性而将其进行改造,使之和人体内的抗体分子具有极其相似的轮廓(profile),从而逃避人免疫系统的识别,避免诱导HAMA反应。进行抗体的人源化有两个基本原则:保持或提高抗体的亲和力和特异性;大大降低或基本消除抗体的免疫原性。人源化有多种方案,都必须遵循这两个原则,尤其不能丧失抗体特异结合的能力。 第一代人源化抗体是将鼠McAb的可变区和人抗体的恒定区组成嵌合抗体。由于这两部分在空间结构上相对独立,其独特的抗原亲和力保持得很好,但因为有鼠McAb可变区的存在,应用时仍有强烈的HAMA反应。 在此基础上，进一步将鼠McAb可变区中相对保守的FR换成人的FR,仅仅保留抗原结合部位CDR(即CDR移植),这才是真正意义上的抗体人源化。但起脚手架作用的FR不仅提供了CDR的空间构象环境,有时还参加抗体结合位点正确构象的形成,甚至参加与抗原的结合[3]。因此，简单的CDR移植往往丧失或降低了原抗体的亲和力。如何在FR中、FR和CDR之间进行操作,目前有几种策略[4]。 2.1 模板