第5章 酶与维生素.ppt

3、 酸碱催化 Bronsted的广义酸碱理论： 提供质子为酸，接受质子为碱。. 酸碱催化：酶分子的某些功能基团，作为酸或碱，通过向底物提供质子或夺取质子来达到加速反应的一类催化。（氨基、羧基、咪唑基、巯基和酚基）。 在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。 当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结合后，反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。 三、酶浓度对酶作用的影响 在有足够底物和其他条件不变的情况下： v = k [E] 五、温度对酶作用的影响 一方面是温度升高,酶促反应速度加快。 另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温度条件下,反应速度最大。 5.5.3 维生素B3 （泛酸）和辅酶A(CoA) 辅酶A是生物体内代谢反应中乙酰化酶的辅酶，它的前体是维生素(B3)泛酸。 米氏常数的意义及测定 v = Vmax/2， 则： km= [S] 意义： （1）km是酶的一个基本的特征常数。其大小与酶的浓度无关，而与具体的底物有关，且随着温度、pH和离子强度而改变。 （2）从km可判断酶的专一性和天然底物。 Km最小的底物，通常就是该酶的最适底物，也就是天然底物。 （3）当k2＞＞k3时， km的大小可以表示酶与底物的亲和性。 当km大，说明ES容易解离，酶与底物结合的亲和力小。 从米氏方程中求得： 当反应速度达到最大反应速度的90%，则 90%V =100%V[S]/(km +[S]) v = —————— Vmax · [S] km + [S] 即 [S] = 9km 在进行酶活力测定时，通常用4km的底物浓度即可。 米氏常数可根据实验数据作图法直接求得：先测定不同底物浓度的反应初速度，从v与[S]的关系曲线求得V，然后再从1/2V求得相应的[S]即为km（近似值）。 通常用: Lineweaver-Burk作图法 （双倒数作图法） + —— — 1 v = —— km Vmax · —— [S] 1 Vmax 1 1/Vmax -1/Km 斜率=Km/Vmax [E] V 四、pH对酶促反应速度的影响 pH v 最适pH（optimum pH） 1.最适pH 2.pH稳定性 表现出酶最大活力的pH值。 在一定的pH范围内酶是稳定的。 3.pH对酶作用的影响机制： (1).环境过酸、过碱使酶变性失活； (2).影响酶活性基团的解离； (3).影响底物的解离。 T v 最适温度 温度的影响： 六、激活剂对酶作用的影响 ——凡能提高酶活力的物质都是酶的激活剂。 激活剂 小分子有机物：抗坏血酸、半胱氨酸、 谷胱甘肽等。 金属离子：K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、 Cr3+、 Fe2+。 注意使用浓度，激活剂的浓度过高、过低不激活反而抑制酶促反应。 七、抑制剂对酶作用的影响 ——使酶的活性降低或丧失的现象，称为酶的抑制作用。 ——降低酶活力甚至使酶失活的物质，称为抑制剂（I）。 抑制作用 可逆抑 制作用 竞争性抑制作用 不可逆抑制作用 非竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用 （一） 不可逆抑制作用 不可逆抑制--抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。 S + E ES E + P + I ↓ EI 如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。 抑制程度是由酶与抑制剂之间的亲和力大小、抑制剂的浓度以及底物的浓度决定。 [E] v 1 2 3 1. 反应体系中不加I。 2.反应体系中加入一定量的不可逆抑制剂。 3.反应体系中加入一定量的可逆抑制剂。 （二） 可逆抑制作用 1、竞争性抑制作用 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。 S + E ES E + P + I ↑↓ EI [S] v km km ′ 无 I 有 I V/2 1）抑制剂和底物竞争酶的结合部位。 3）抑制程度取决于I和S的浓度以及与酶结合的亲和力大小。 2）竞争性抑制剂的结构与底物结构十分相似。 竞争性抑制作用特点： 2、非竞争性抑制作用 酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，并导至酶活性下降。由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以称为非竞争性抑制剂。 如某些金属离子（Cu2+、A