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三 酵母表达系统 （一） 酿酒酵母表达系统 （二） 甲醇酵母表达系统 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 1、甲醇酵母与甲醇氧化酶启动子 2、甲醇酵母表达系统的优缺点 3、甲醇酵母表达系统操作原理 甲醇酵母系统宿主 甲醇酵母系统宿主 甲醇酵母系统宿主 甲醇酵母系统的整合事件 毕赤酵母系统模式表达载体 1）AOX1位点插入 2）His4位点插入 3） 多基因插入事件（串联整合） 4） 基因取代（GS115，AOX1+） 汉森酵母系统的高拷贝整合型表达载体 甲醇酵母系统胞内表达载体 甲醇酵母系统胞内表达载体 甲醇酵母系统分泌表达载体 甲醇酵母系统分泌表达载体 甲醇酵母系统分泌表达载体 4、甲醇酵母系统高效表达影响因素与对策 1）载体稳定性 2）基因剂量 3）整合位点 5）mRNA5’端 7）分泌信号 表达载体类型 需要带入ATG 单位点 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 表达载体类型 需要带入ATG 多位点 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 信号肽：PHO1 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 信号肽：MFα Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 信号肽：MFα 标记：Kan Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 载体稳定性 基因剂量 整合位点 甲醇利用表型 mRNA5’端 AT含量分泌信号 表达产物稳定性 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 同拷贝数时，整合型的比自主复制型的表达水平高 YRp型载体的稳定化： 选择—非选择培养交替数十代可得稳定的整合子，但费时，整合位点不确定。 采用YIp型载体: 更易实现整合、整合位点清楚 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 外源基因表达存在基因剂量效应 筛选多拷贝整合子 载体引入G418/Zeocin抗性标记，整合子拷贝数与抗性成正相关，采用高G418/Zeocin抗性转化子。 体外串联多个表达盒，直接获多拷贝整合子 采用YRp型载体稳定化技术获高拷贝整合子 构建高拷贝整合型表达载体 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 外源基因表达盒整合于AOX/MOX或标记基因处，均可高效表达 毕赤酵母中个别情况整合于His4位点的比AOX1位点的低 4）甲醇利用表型 在分泌表达情况下，甲醇慢生长型更利于表达 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 真菌基因工程 三、酵母表达系统 二、酵母转化系统 一、真菌表达系统的优缺点 四、丝状真菌表达系统 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 C
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