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第一章 1.简述酶与一般催化剂的共性以及作为生物催化剂的特点 共同点：只能催化热力学所允许的的化学反应，缩短达到化学平衡的时间，而不改变平衡点：反应前后酶本身没有质和量的改变：很少量就能发挥较大的催化作用：其作用机理都在于降低了反应的活化能。 酶作为生物催化剂的特点：1.极高的催化率；2.高度专一性；3.酶活的可调节性；酶的不稳定性。 5.酶失活的因素和机理。 酶失活的因素主要包括物理因素，化学因素和生物因素 物理因素 1热失活：热失活是由于热伸展作用使酶的反应基团和疏水区域暴露，促使蛋白质聚合。 2冷冻和脱水：很多变构酶在温度降低是会产生构象变化。在冷冻过程中，溶质（酶和盐）随着水分子的结晶而被浓缩，引起酶微环境中的pH和离子强度的剧烈改变，很容易引起蛋白质的酸变性。 3.辐射作用：电离辐射和非电离辐射都会导致多肽链的断裂和酶活性丧失。 4.机械力作用： 化学因素 1.极端pH：极端pH远离蛋白质的等电点，酶蛋白相同电荷间的静电斥力会导致蛋白肽链伸展，埋藏在酶蛋白内部非电离残基发生电离，启动改变。交联或破坏氨基酸的化学反应，结果引起不可逆失活。极端pH也容易导致蛋白质水解。 2.氧化作用：酶分子中所含的带芳香族侧链的氨基酸以及Met, Cys等，与活性氧有极高的反应性，极易受到氧化攻击。 3.聚合作用：加热或高浓度电介质课破坏蛋白质胶体溶液的稳定性，促使蛋白质结构发生改变，分子间聚合并沉淀。 4.表面活性剂和变性剂：表面活性剂主要改变酶分子正常的折叠，暴露酶分子疏水内核的疏水基团，使之变性；变性剂与酶分子结合，改变其稳定性，使之发生变性。 生物因素 微生物或蛋白水解酶的作用使酶分子被水解。 6.简述酶活力测定方法的原理 直接测定法：有些酶促反应进行一段时间后，酶底物或产物的变量可直接检测。 间接测定法：有些酶促反应的底物或产物不易直接检测，一次必须与特定的化学试剂反应，形成稳定的可检测物。 酶偶联测定法：与间接测定法相类似，只是使用一指示酶，使第一酶的产物在指示酶的作用下转变成可测定的新产物。 第二章 1.在酶制剂工业生产中为什么以微生物发酵生产为主？ 应用微生物来开发酶有下列优点：1.微生物生长繁殖快，生活周期短。2.微生物种类繁多。3.当基因工程介入时，动植物细胞中存在的酶，几乎都能够利用微生物细胞获得。 2.影响酶制剂发酵的因子有哪些？ 培养基的成分，发酵条件，发酵方法。 3，酶制剂发酵生产的方法有哪些？各有何优势？ 固体培养法：（转桶法，厚层通气法）。优点：1.单位体积培养设备中的产酶量高；2节省动力；3由污染引起的问题少，易于管理；4.酶抽提液的浓度可任意调节；5.后处理设备小。 液体深层培养法。优点：设备占地面积小、生产可以机械化，自动化。 4.如何提高酶的产量？ 1.添加产酶促进剂；2.菌种诱变；（生产组成型酶突变株的筛选，抗分解代谢阻遏突变株的选育，抗反馈阻抑突变株的筛选）。 第三章 2从植物细胞培养产酶的特点分析，为什么与植物体产酶比植物细胞产酶更有优势？ 1. 次生物质的生产是在可控制的条件下进行的，因此可以通过改变培养条件和筛选细胞系来提高次生代谢产物的产率 2. 培养细胞是在无菌条件下进行的，因此可以排除病菌和虫害的影响，以及环境中的有害物质污染，从而提高产品质量。 3. 植物细胞的倍增时间一般为12~60h，发酵周期为10~30d，与植物生长周期相比，大大缩短了生产周期。 4. 可以进行特定的生化转化反应和探索新的合成路线，以获得新的有用物质。 3用于产酶的植物细胞的来源有哪些？ 1直接从外植体中分离得到；2通过诱导愈伤组织而获得；3分离原生质体后再经过细胞壁再生而获取所需的植物细胞。 4动物细胞培养前都需要做哪些准备工作？ 1基质的准备 2 培养环境的准备【营养物质，细胞的生产环境（温度，气相，pH，渗透压）】 3 细胞的准备（原代细胞培养，传代细胞培养） 5根据细胞在培养基中的位置不同，动物细胞的培养方式有哪些？ 1 贴壁培养，2 悬浮培养，3 微载体培养系统，4 包埋培养，5 微囊化培养。 第四章 1 什么是克隆酶？试述克隆酶生产的基本过程。 克隆酶：利用DNA重组技术而大量生产的酶，称克隆酶。 克隆酶生产的基本过程：1 目的基因的获得；2 载体的选择；3 目的基因与载体分子的连接（黏性末端，平末端的连接）；4 重组DNA的转化；5 克隆酶基因的表达（原核生物，真核生物的表达系统） 2 什么是基因的定点诱变技术？目前已建立的定点诱变方法主要有哪些？ 定点诱变技术：通过取代、插入或缺失克隆基因或DNA序列中的任何一个特定的碱基，从而实现心中体外特异性改变某个基因，这种技术称为定点突变技术。 已建立的定点诱变方法主要有盒式诱变、寡核苷酸引物诱变、PCR诱变 3 什