第八章_发酵过程参数的检测及控制精选.ppt

氮源过多 生理碱性物质的存在 中间补料，碱性物质添加过多 3、引起pH上升的因素 调节基础培养基的配方 调节碳氮比（C/N） 添加缓冲剂 补料控制 直接加酸加碱 补加碳源或氮源 4、 pH的控制 （三）溶氧控制 通气量 搅拌速度 培养基组成 补料方式及速率 富氧空气 反应器型式 罐压 …… （四）泡沫控制 通气与搅拌 培养基组成 培养液性质变化 灭菌 染菌 …… 1、 影响泡沫稳定的因素 2、泡沫控制的方法 化学消泡——天然油脂、泡敌等。 机械消泡 罐内 罐外 其他方法 调节通风与搅拌、增大罐压、…… （五）补料控制 1、基质浓度对发酵的影响 抑制生长 饥饿 根据经验控制； 以pH、尾气、溶氧、产物浓度等参数间接控制流加； 用传感器直接测定限制性基质的浓度，直接控制流加； …… 2、补料控制的策略 ！！！！ R：各控制参数 pH DO 预设补料速率 …… 四、发酵染菌的危害与防止 所谓“杂菌”， 是指在发酵培养中侵入了有碍生产的其他微生物。 防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重要工作内容。 （一）发酵过程中染菌的检查判断 １、生产上常用杂菌检查方法 镜检（简便快速，早期染菌不易检出) 平板划线 酚红肉汤培养 2、辅助检查方法 溶解氧 pH值 尾气中CO2含量 能检出更少杂菌，结果更准确 需时较长，操作较繁琐 发酵染菌的主要原因 仪器设备的渗漏 仪器、设备、管道、管件存在死角 操作不当 预防为主，“防重于治” （二）发酵过程染菌原因的分析 （１）国外一抗生素发酵染菌原因的分析 染菌原因 百分率，% 染菌原因 百分率，% 种子带菌 9.64 蛇管穿孔 5.89 接种时罐压跌零 0.19 接种管穿孔 0.39 培养基灭菌不透 0.79 阀门泄漏 1.45 空气系统带菌 19.96 罐盖漏 1.54 搅拌轴密封泄漏 2.09 其他设备漏 10.13 泡沫冒顶 0.48 操作问题 10.15 夹套穿孔 12.36 原因不明 24.91 （２）国内一制药厂发酵染菌原因的分析 染菌原因 百分率，% 外界带入杂菌（取样、补料带入） 8.20 设备穿孔 7.60 空气系统带菌 26.00 停电罐压跌零 1.60 接种 11.00 蒸汽压力不够或蒸汽量不足 0.60 管理问题 7.09 操作违反规程 1.60 种子带菌 0.60 原因不明 35.00 大批发酵罐染菌 →空气系统 部分发酵罐(或罐组)染菌 前期→种子带杂菌，或灭菌不彻底 中后期→中间补料系统或管路系统发生问题 个别发酵罐连续染菌 设备问题(如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损) 设备的腐蚀磨损（出现每批发酵的染菌时间向前推移的现象） 个别发酵罐偶然染菌→原因比较复杂 （３）从染菌的规模来分析染菌原因 ？ 分析 分析 发酵早期染菌：种子带菌、培养基和设备灭菌不彻底、设备或管道有死角 中、后期染菌：中间补料、设备渗漏、操作不合理 （４）从染菌的时间来分析 耐热性芽抱杆菌：死角或灭菌不彻底 球菌、酵母：可能是从蒸汽的冷凝水或空气中带来的 浅绿色菌落(革兰氏阴性杆菌) ：发酵罐的冷却管或夹套渗漏 霉菌：灭菌不彻底或无菌操作不严格 （５）从染菌的类型来分析 １. 种子带菌的原因及防止 带菌的原因 无菌室的无菌条件不符合要求、培养基灭菌不彻底、操作不当。 种子带菌的防止 保持卫生 规范操作 （三）发酵染菌的防止 ２. 发酵设备、管件的渗漏与配置 设备和管件的微小漏孔。 试漏方法 气压试验 水压试验 阀门试漏的方法 ３. 发酵罐与管件的死角 死角是指灭菌时因某些原因使灭菌温度达不到或不易达到的局部地区。 （1）法兰连接的死角 （２）渣滓在罐底与用环式空气分布管所形成的死角 （３）不锈钢衬里的死角 （４）接种管路的死角 如下图a所示有一小段管路存在蒸汽不流通的死角 解决办法：装设旁通（小放气阀） （５）排气管的死角 （6）压力表安装不合理形成的死角 第八章发酵过程的监测与控制 发酵过程的中间分析是生产控制的眼睛。 按性质分 物理参数：温度、搅拌转速、空气压力、空气流量、溶解氧、表观粘度、排气氧（二氧化碳）浓度等 化学参数：基质浓度（包括糖、氮、磷）、pH、产物浓度、核酸量等 生物参数：菌丝形态、菌浓度、菌体比生长速率、呼吸强度、基质消耗速率、关键酶活力等 一、发酵过程检测的主要参数 从检测手段分 直接参数：通过仪器或其它分析手段可以测得的参数，如温度、pH、残糖等 ①在线检测参数：不经取样直接从发酵罐上安装的仪表 上 得到的参数，如温度、pH、搅拌转速； ②离线检测参数：取出样后测定得到的参数，如残糖、 NH2-N、菌体浓度。 间接参数：将直接参数经过计算得到的参数，如摄氧率、KLa等 二、发酵过程参数常