第八章微生物监测环境精选.ppt

一、一般污染指示微生物 指示微生物：在常规环境监测中，用以指示环境样品污染性质与程度，并评价环境卫生状况的具有代表性的微生物。 （一）细菌总数 1、定义：环境中被测样品在一定条件下培养后所得的1mL或1g检样中所含有的细菌菌落总数。 反映环境中异养型细菌的污染从度，也间接反映一般营养性有机物的污染程度。 2、方法 （1）液态与固态对象中的细菌总数： 将经过一定倍数稀释的样品悬液，定量接种（倾注或图布）于营养平板，有氧37℃培养48h后观察菌落。 （2）空气中的细菌总数： 平板暴露沉降法采用直径9cm平皿在1.2m高处暴露5min，培养计数； 奥氏公式：5min内落在100cm2营养琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的细菌数相同 最小采样量和最小沉降面积（为避免出现“0”粒的概率，确保结果可靠性）。 仪器法采用固体撞击式采样器。 一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。 （二）霉菌和酵母菌总数 意义：偏酸性好氧条件，存活力强，有机营养物广泛；反映环境的一般性污染。 方法：虎红培养基、察氏培养基等；倾注平板法； 25-28℃ 3-5天。 结果： cfu/ml或cfu/g 卫生标准： 方法评价：主要适用于霉菌，酵母菌附带生长，均非环境中全部酵母菌。 二、粪便污染指示菌 （一）粪便污染指示菌的理想条件： 是人畜粪便中的正常菌，且数量较粪便中其他菌为多 受人畜粪便污染的环境中可检出，而未受污染环境无该菌存在 排出至环境后，该菌存活时间与肠道致病菌相当或略长 对氯等消毒剂及其他不良因素的抵抗力略强于肠道致病菌 检出与鉴定方法比较简便迅速 （二）总大肠菌群 是一群能在37℃，24h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的G-无芽孢杆菌； 主要包括四个菌属：埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属； 方法：多管发酵法、滤膜法。 1、多管发酵法 初发酵：在2个各装有已灭菌的50mL浓乳糖蛋白胨的大发酵瓶中，无菌操作加入水样100mL；在10只含5mL培养基的发酵管中加水样10mL，混匀后37℃培养24h； 如无酸及气体产生，为“－”；如有酸和气体，或无气体但有酸产生，为“＋”；如有气体产生，但没产酸，溶液也不浑浊，可能是操作技术 问题，须重作检验； 平板分离：从阳性管中取液，分 别接种在品红亚硫酸钠培养基或 伊红美蓝培养基上，注意编号， 37℃培养24h。 多管发酵法 如无细菌增殖现象，为“－”；如仅发现芒状、霉状或其他无关菌属的菌落，为“－”；挑取符合下列特征的菌落1/3涂片、G染色、镜检； 品红亚硫酸钠培养基：紫红色，具金属光泽；深红色，不带或略带金属光泽；淡红中心色较深； 伊红美蓝培养基：深紫黑色，具金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心色较深。 多管发酵法 复发酵试验：挑取镜检G-无芽孢杆菌的其余部分菌落，接种于含10mL普通浓度乳糖蛋白胨培养基的发酵管中，37℃培养24h，观察产酸产气； 根据复发酵结果，统计出阳性管及瓶数，查表得出总大肠菌群数。 多管发酵法 水源水检验时水样稀释10倍，预备15支发酵管，5支装5ml浓培养基，加水样10ml；10支装10ml普通培养基，5支加水样1ml，5支加稀释水样1ml；以后检测同饮用水，根据存在的阳性管数查另外的检数表。 滤膜法 比发酵法缩短时间，有可能在24h内完成。 孔径0.45-0.65μm，多孔性硝化纤维膜； 滤膜灭菌：蒸馏水煮15min×3次； 滤器灭菌：酒精棉球火焰灭菌或121℃ 30min； 过滤水样：粗糙面向上，过滤水量的确定以培养后滤膜上长出的菌落不多于50个为原则。 滤膜法 水样过滤后，继续抽气5s关闭，带菌滤膜置于品红亚硫酸钠培养基上，二者之间不得留有气泡，37℃培养24h； 挑取特征菌落染色镜检； G-无芽孢杆菌的穿刺接种到乳糖蛋白胨半固体培养基（预先煮沸排气），37℃培养6～8h，产气者为“＋”，培养基内部形成龟裂状，甚至部分上浮； 结果与卫生标准： 大肠菌群数（个/L或个/ml）；饮用水标准：0个/100ml，土壤100个/g 大肠菌群值：水样中可检出1个大肠菌群细菌的最小水样容积；土壤10-2 方法评价：发酵法耗时长、滤膜法不适于混浊度高的水样、结果可能不准确、不能指示水中细菌；来源不单一；不能指示病毒 新进展：“大肠菌群产色基质试验” 粪大肠菌群 能在44.5℃发酵乳糖的大肠菌群，亦称耐热性大肠菌群。 粪大肠菌群与粪便中大肠杆菌数直接相关，且在外环境中不易繁殖，因此意义更大。 方法：多管发酵法、滤膜法 EC培养基：三号胆盐、胰蛋白胨、乳糖 M-TEC培养基：眎蛋白胨、酵母膏、乳糖、十二烷基磺酸钠、脱氧胆盐钠、溴甲酚紫、溴酚红等 粪大肠菌群 结果：同总大肠菌群 卫生标准： 方法评