黄酮、多酚的测定 3.docVIP

多酚精确称取没食子酸标准品25mg，用水溶解并定容至250ml，得对照品标准溶液。精密吸取对照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml于25m比色瓶中，再加入1ml福林酚显色剂，摇匀后再加入2ml?10%?Na2CO3溶液，定容至10ml，室温下反应20min后测定A760.取一定量的香椿加蒸馏水碾碎，测其上清液测定。（根据吸光值自己调整量）称取剪碎的香椿0.5g（按需称取），加入5?mL?80%乙醇研磨过滤，将滤液放置20?min。取0.1?mL滤液，加入5?mL水及0.5?mL福林酚反应8?min，再加1.5?mL?10%的碳酸钠溶液，于760?nm处测定吸光度值。根据标准曲线算出总酚含量。黄酮精确称取芦丁标准品10mg，加入几滴无水乙醇溶解，然后用60%乙醇定容至100ml，得对照品标准溶液。取芦丁标准液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80?和1.00?mL?分别放入1～6号25ml比色管中，然后分别加入5ml蒸馏水，加入0.2mL?5%NaNO2，摇匀,静置6min?;再分别加入0.2mL?10%Al(NO3)3，摇匀，静置6min，再分别加入1mL?4%NaOH，用60%乙醇定容至刻度10ml处,摇匀，静置15min，然后于510nm下测吸光度。取一定量的香椿加60%乙醇碾碎，测其上清液测定。（根据吸光值自己调整量） DPPH法测定沙棘籽原花青素清除自由基的能力 首页 期刊 过刊浏览 大学学报 《宁夏医科大学学报》 2009年2月31卷1期论著 文章详情 【摘要】 目的 研究沙棘籽原花青素体外抗氧化活性。方法 DPPH法测定沙棘籽原花青素抗氧化、清除自由基能力。结果 沙棘籽原花青素抗氧化、清除自由基能力略低于抗坏血酸，清除DPPH 自由基的半数有效量分别为93.0g/kg和70.3g/kg，自由基清除能力分别为0.0107和0.0142。结论 沙棘籽原花青素具有抗氧化活性。 【关键词】 沙棘籽 原花青素 DPPH 沙棘是胡颓子科，多年落叶乔木或灌木，能防风固沙、保持水分、改良土壤，具有优异的生态效益［1］。主产于我国内蒙、宁夏、青海等地，不仅是西部生态治理的优选植物，而且具有很高的药用价值，被誉为“高原圣果”。近年来国内外根据沙棘果实的传统用药，将鲜果开发出沙棘果汁、沙棘口服液、沙棘油等产品，但是作为沙棘果实加工业副产品的沙棘籽，还没有被有效的开发利用。国内外研究表明不同沙棘籽提取物具有抗氧化作用，沙棘籽总黄酮有直接捕获超氧自由基和羟自由基，清除大鼠体内自由基的作用［2-3］。而沙棘籽还富含原花青素［4］，原花青素(Proanthocyanidins)是由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成的黄烷-3-醇衍生物的总称。目前对沙棘籽原花青素清除自由基的作用研究未见相关报道，为此本文对沙棘籽原花青素进行体外抗氧化作用的研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 UV-2550紫外分光光度计(日本岛津)，FW110型高速粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)，RE-F20旋转蒸发仪(长城亚荣生化仪器厂)，AE240十万分之一电子分析天平(瑞士梅特勒)；DPPH标准品(美国SIGMA公司)，抗坏血酸(分析纯，广州化学试剂厂，批1)，儿茶素标准品(中国药品生物制品检定所)，其余试剂均为分析纯。沙棘籽采自宁夏六盘山，经隆德县林业局鉴定为中国沙棘亚种(H.rhamnoides L.subsp.sinensis Rousi)。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 DPPH法测定原花青素抗氧化、清除自由基的原理 　　二苯基苦味肼基自由基［DPPH·］是一种稳定的以氮为中心的自由基，在517nm波长处有最大吸收。［DPPH·］乙醇溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系。在［DPPH·］乙醇溶液中加入原花青素后，原花青素可以与［DPPH·］结合或发生替代，使［DPPH·］数量减少，溶液颜色变浅，表现为：其在517nm波长处的吸光度不断减小，直至达到稳定。因此，可以通过在517nm 波长处检测原花青素对［DPPH·］自由基的清除效果，计算其抗氧化能力。 　　1.2.2 DPPH标准曲线的制作 　　精密称定DPPH标准品9.06mg，乙醇定容至100mL，配制成质量浓度为90.6μg/mL的标准溶液，置4℃冰箱中保存备用。分别吸取1、1.5、2.5、5、10mL标准溶液，乙醇定容至10mL，517nm测其吸光度，以浓度C为横坐标，以吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为A=0.0149C+0.0062，R2=0.9994 　　1.2.3 沙棘籽提取物的制备 　　将干燥的沙棘籽用高速粉碎机粉碎处理，过100目筛，称取适量，