10,11,12生化-核酸介绍.ppt

2、碱水解 特 点： （1）DNA的磷酸酯键及糖苷键对碱均稳定，不发生水解反应。 （2）RNA水解产物是2′-核苷酸和3′-核苷酸的混合物。 反应过程 见p88 （3）利用RNA的水解反应可以除去DNA中的RNA。 3、酶水解 特点：在核酸酶的催化下的水解反应。 常见的酶有： 核酸外切酶、 核酸内切酶； 脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶。 实验室用的比较多的是限制性内切酶，该酶对被水解的核酸碱基序列具有专一性。 3、磷酸 核酸中的磷酸基团使核酸体现酸性。 水溶液中核酸带负电。 第四节、核酸的共价结构 一、核酸的连接方式 核苷酸间通过3/,5/-磷酸二酯键连接。 5/-端有一个游离的磷酸基； 3/-端有一个游离的羟基。 二、核酸的一级结构 定义：核酸分子中碱基的组成和排列顺序。 三、核酸的书写 DNA示例: 5/-AGCTTCAGGCCT-3/ AGCTTCAGGCCT RNA示例: 5/-AGCUUCAGGCCU-3/ AGCUUCAGGCCU 四、核酸序列测定 目前DNA序列测定采用Sanger发明的酶法（双脱氧法）和Maxam和Gilbert发明的化学法。 核酸的高级结构指核酸分子的空间结构，也即空间构象。 一、DNA的高级结构 基础一：Chargaff 规则----是关于DNA碱基组成的规律。 包括: (1) A=T, G=C, A+G=C+T; (2)碱基组成具有种属特异性； (3) 同个体的碱基组成是固定的。 基础二：1951年，富兰克琳和维尔金斯取得了DNA晶体的X射线衍射图谱，提出了DNA中存在着周期性的螺旋结构。 双螺旋结构要点： 二、核酸的紫外吸收 由于碱基中有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240-290波段有吸收峰，核酸在260nm紫外光区有最大光吸收。 与溶液的pH、核酸变性、单链和双链有关。 应用二：A260可用于核酸的定量分析 纯核酸样品的定量：测A260 A260=OD260＝1　相当于： 50ug/ul 双链DNA 40 ug/ul 单链DNA或RNA 　　 20ug/ul 寡核苷酸　　　 DNA的熔点或熔解温度(Tm) ：常将引起DNA双螺旋结构失去一半时(将紫外吸收的增加量达最大增量一半时)的温度值称为该DNA的熔点或熔解温度用Tm 表示。 1、DNA酶法测序原理 * * 螺旋产生的模拟图 （1）超螺旋的形成总是要向着抵消初级螺旋改变的方向发展 （2）所有生物的DNA几乎 有5%为 负超螺旋 体内负超螺旋的存在有利于DNA的复制、转录RNA等过程。 超螺旋的特点和其生物学意义 3、DNA的染色体结构（了解） 核小体结构 1. tRNA的高级结构(转运RNA) tRNA的二级结构 tRNA 三叶草形结构特征部位： 氨基酸接受臂 二氢尿嘧啶环 反密码环 额外环（差异较大，是分类的指标） TψC环 二、 RNA的高级结构 tRNA的三级结构 　倒L型 2. rRNA的高级结构 构成核糖体的主要物质之一 原核生物 30S 40S 50S 60S 70S 80S 核糖体亚基组成 原核生物 16S rRNA 18S rRNA 真核生物 记 忆：3，4，5，6，7，8 3. mRNA(信使RNA)的高级结构 游离的mRNA可以产生高级结构 ，但在核糖上翻译时必须解开。 在真核细胞中还有少量的： 核内小RNA（snRNA)： 可识别、加工RNA。 核不均一RNA（hnRNA）： mRNA的前体。 反义RNA（asRNA）： 可与mRNA部分或全部序列互补；抑 制DNA复制、转录；抑制mRNA翻译。 第六节 核酸的理化性质 一、核酸的酸碱性质 二、核酸的紫外吸收 三、核酸的变性、复性与杂交 一、一般理化性质 分子中的碱基、核苷、核苷酸均可发生解离。 核苷酸的等电点。在制备、分析中应用。 DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。原因：是RNA分子中核糖基 2′-OH 通过氢键促进了磷酸基上质子的解离。 应用一：A260/A280的比值可用于判断样品的纯度 A260/A280比值: 1.8　　　纯DNA 达到2.0　? 纯RNA 1.8　　　有杂蛋白 三、核酸的变性、复性及杂交 1. 核酸的变性 变 性 在某些理化因素下，双螺旋结构解体，成为无规则单链，共价键不改变。 DNA热变性后，形成无规卷曲，粘度下降，沉降系数和浮力密度增加。 增色效应与减色效应： 增色效应：双链DNA变性过程中其光吸收升