2-革兰氏染色法浅析.ppt

CHERY AUTOMOBILE 1 微生物学实验 了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴 定中的重要性 。 掌握革兰氏染色的操作方法。 巩固无菌操作技术。 实验原理 之所以能通过染色区分是因为两类细菌细胞壁结构和成分存在差异。 革兰氏阳性菌（G+）：细胞壁的肽聚糖厚，含脂质少。染色时乙醇、丙酮处理不能使初染的结晶紫洗脱，复染的红色不能遮盖紫色。 革兰氏阴性菌（G－）：细胞壁的肽聚糖薄，含脂质多。染色时乙醇、丙酮处理使细胞壁上的脂质去掉，加上细胞壁的肽聚糖本来薄，初染的结晶紫被洗脱，只显示复染的红色。 三.实验步骤: 1. 制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 常规涂片、三区涂片，一定不能太厚。 2. 初染：滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2分钟，水洗。 3. 媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1分钟，水洗。 4. 脱色：用滤纸吸取载玻片上的残水，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。 三.实验步骤: 注意：乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。脱色时间一般为20-30秒。 5. 复染：用番红液复染约2分钟，水洗。 6. 镜检：干燥后，用油镜观察。 7. 观察完毕，用擦镜纸、乙醇或二甲苯清理油镜。 作业 根据观察结果，画出大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的形态图，并注明菌体染色后的颜色，说明是G+还是G-。 预习实验三：酵母菌的形态观察和显微镜直接计数法 沈阳广众 * 实验二 革兰氏染色法 刘刚 执 教 单 位 生命科学学院 实验目的 沈阳广众