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1 限制性片段长度多态性(RFLP) 限制性片段长度多态性( RFLP) 是指用限制性内切酶切割不同个体基因组DNA后, 含同源序列的酶切片段在长度上的差异。 Botsten等于1980年首先提出用RFLP构建遗传连锁图, 其基本原理是将不同生物个体的基因组DNA分子采用适当的限制性内切酶切割, 将酶切片断电泳后利用探针杂交并放射自显影,就可以得到与探针高度同源的DNA带型。由于植物不同种、属间甚至品种间同源序列的限制性内切酶识别位点各不相同, 因此通过比较RFLP片段的多态性,就可以揭示种、属间甚至品种间的差异及相关性。 RFLP标记优缺点 RFLP标记具有共显性、可以区别纯合和杂合基因型、稳定、重复性强等优点。目前在某些生物体中开发的RFLP的探针已经遍及整个基因组。 然而由于RFLP具有种属特异性，技术复杂，对DNA需要量大、纯度要求高且所需的放射性探针对人体危害大， 所以使其应用受到很大限制，此技术在医学上有所发展外，在植物学研究上已经极少使用, 在中药上的应用前景也不被看好。 RFLP标记的应用 2006年, 高晓霞等利用真核生物通用引物扩增rDNAITS序列并对扩增产物进行RFLP分析, 其ITS-RFLP酶切图谱显示可以对佛手和香橼基缘植物进行分子鉴定。 2005年, 张婷等对束花石斛、流苏石斛及其形态相似种进行研究, 通过PCR-RFLP方法获得ITS片段的限制