Ⅴ-enzyme molecular modification artificial enzyme课件.pptVIP

* 1）二酮： 丁二酮： ， 环已二酮： ? 2）苯酰甲醛（phenylglyoxal）： ? ? ? ? 该反应本质上是羰基对氨基酰基化(二羰基化合物)。 该反应一般是可逆的，需加硼酸盐使产物与之反应而稳定下来。但用苯酰甲醛时反应不可逆，不需加硼酸盐。 * 苯酰甲醛 * 5.3.4.5酚基修饰 蛋白质分子的酪氨酸残基上含有酚基。通过修饰剂的作用使酶分子上的酚基发生改变，从而改变酶蛋白的空间构象和特性的修饰方法称为酚基修饰。 ?酚基修饰的方法主要有碘化法、硝化法、琥珀酰化法等,其中四硝基甲烷（TNM）可以高度专一地对酚羟基进行修饰。 例如，枯草杆菌蛋白酶的第104位酪氨酸残基上的酚基经四硝基甲烷硝化修饰后，生成3-硝基酪氨酸残基，由于负电荷的引入，使酶对带正电荷的底物的结合力显著增加。 ? * 修饰酪氨酸 修饰苯环： 1）碘代： I2＋ ? + HI ? 2）硝化： (NO2)4C + ? +(NO2)3CH?? 1 * 修饰酚羟基： N-乙酰咪唑: N-ethyl imidazole + ? * 5.3.4.6修饰醇羟基 对苯甲磺酰氟（PMSF）， E－OH + ? + HF ? 二异丙基氟磷酸（DFP），生成氟磷酸酯。 * 5.3.4.7咪唑基修饰 蛋白质分子中的组氨酸含有咪唑基。咪唑基是许多酶活性中心上的必需基团，在酶的催化过程中起重要作用。 通过修饰剂与咪唑基反应，使酶分子中的组氨酸残基发生改变，从而改变酶分子的构象和特性的修饰方法成为咪唑基修饰。 常用的咪唑基修饰剂有碘乙酸、焦碳酸二乙酯。 ? * 1）通常通过对咪唑基上氮原子酰基化或烷基化修饰组氨酸咪唑基。 焦碳酸二乙酯（diethyl paracarbonate）是最常用的一个试剂： + ? + C2H5OH +CO2? * 碘代乙酸： +ICH2COOH ? + HI ?? 2) 也可以对咪唑基上碳原子进行亲核取代： I2 + I2 ? + HI ? + HI * 蛋白质分子中的色氨酸含有吲哚基。通过改变酶分子上的吲哚基而使酶分子的构象和特性发生改变的修饰方法称为吲哚基修饰 ? N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）可以对吲哚基进行修饰，但是酪氨酸也可以与其反应，而产生干扰作用。 吲哚基修饰 * ? 5.3.4.8分子内交联修饰 含有双功能基团的化合物（又称为双功能试剂）如戊二醛、己二胺、葡聚糖二乙醛等，可以在酶蛋白分子中相距较近的两个侧链基团之间形成共价交联，从而提高酶的稳定性的修饰方法称为分子内交联修饰。 ? 交联剂的种类繁多，不同的交联剂具有不同的分子长度，其交联基团、交联速度和交联效果也有所差别，可以通过试验找出适宜的交联剂进行分子内交联修饰。 * 5.3.5 氨基酸置换修饰 酶蛋白是由各种氨基酸通过肽链联结而成。在特定位置上的氨基酸残基种类决定酶的化学结构和空间结构,从而决定了酶的功能。若将肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基酸，会引起酶蛋白空间构象的某些改变，从而改变酶的某些特征和功能。这种修饰方法称为氨基酸的置换修饰。 通过氨基酸的置换修饰，可提高酶活力或增加酶的稳定性。 氨基酸置换修饰除了在酶工程方面应用时，还可以用来修饰其他功能蛋白或多肽分子。 * 1)化学修饰法 难度大，成本高，专一性差。 有科学家把