角膜组织工程__培训课件.ppt

生物羊膜 羊膜的制备和保存 将胎盘取出后，立即在层流罩下用含50mg/L青霉素、50mg/L链霉素、100mg/L新霉素及25mg/L两性霉素的平衡盐溶液清洗表面凝血块.从绒毛膜间的潜在腔隙中钝性分离出羊膜，将其上皮面朝上，平铺于0.45μm微孔硝酸纤维素膜上，切成3cm×4cm大小，储藏于-80℃，含有Eagle基质和甘油（1∶1）混合液的无菌瓶内备用。鉴于羊膜的制作和保存条件不足所带来的医用安全问题，灭菌生物羊膜已上市并投入使用. 羊膜作为移植底物，是提供基质，而不是移植上皮活细胞.羊膜中含有Ⅳ型胶原蛋白（与结膜中Ⅳ型胶原蛋白相同，可刺激杯状细胞的分化）、整合素及板层体等多种成分，是结膜上皮化的合适附着物，为病变组织提供健康的上皮下基质环境. 展望 理想人工角膜应具有以下特点： ①优良的光学特性，稳定的物理化学性质。 ② 能够与自体角膜组织长期共存，并紧密结合。 ③无不良反应，并发症少。 ④手术简单，制作容易，经济实惠。 今后，人工角膜的研究重点是集中生物材料学、细胞生物学、分子生物学及临床医学专家联合攻关，选择真正生物相容性材料，改善光学镜柱和周边支架的整合，更重要的是周边支架和受体组织的整合。 疑问 （1）到底什么是角膜？ （2）常说的角膜移植是怎么回事？ （3）角膜移植中的角膜来源于哪里？ （4）盲人，近视，远视，白内障都可以进行角膜移植而恢复视力吗？ 角膜 眼角膜是眼睛前端一层透明薄膜 ，角膜完全透明，位于眼球前部，呈横椭圆形。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。 角膜分为五层，组织学上从前向后分为： ①上皮细胞层：厚约35μm，由5～6层鳞状上皮细胞组成，无角化，排列特别整齐，易与其内面的前弹力层分离； ②前弹力层：厚约12μm，为一层均质无细胞成分的透明膜； ③基质层：厚约500μm，占角膜厚度的90%，由近200层排列规则的胶原纤维束薄板组成，其间有角膜细胞和少数游走细胞，并有粘蛋白和糖蛋白填充； ④后弹力层：为较坚韧的透明均质膜，成年人厚约10～12μm； ⑤内皮细胞层：厚5μm，为一层六角形扁平细胞构成，细胞顶部朝向前房，基底面向后弹力层。 角膜移植 概念 用正常的眼角膜替换患者现有病变的角膜，使患眼复明或控制角膜病变，达到增进视力或治疗某些角膜疾患的眼科治疗方法。 适用症状 适合于各种原因造成的角膜混浊或水肿而严重影响视力的病变 。 例如：病毒性角膜炎 被酸、碱化学物烧伤的角膜混浊患者 先天性角膜变性、圆锥角膜、角膜基质变性、角膜内皮细胞功能失代偿等患者 角膜肿瘤、角膜瘘、角膜葡萄肿患者 已失明的角膜白斑患者 材料来源 传统 现代 活体捐赠 尸体捐赠 活体捐赠 尸体捐赠 人工角膜 活体捐赠顾名思义供体是活人， 因外伤、视神经疾患、颅内疾 患等原因导致失明（无光感） 而角膜却是完好无损的眼球， 均是合适的供体。 返回 人工角膜 基本简介 　　世界上超过1000万人的眼盲是由角膜病引起，为导致眼盲的第二大原因，仅次于白内障。其中80%可以通过角膜移植手术脱盲。然而，传统的角膜移植手术有其两大弊端，一是角膜供体的来源困难，二是手术成功率低。人工角膜的出现及应用为角膜盲患者带来了希望。 基本结构 人工角膜是用医用高分子材料制成的类似人体角膜的产品 。 人工角膜材料 无机材料 有机材料 生物材料 玻璃，羟基磷灰石?，?生物玻璃陶瓷? 硅凝胶?，聚甲基丙烯酸甲酯 ，氟碳多聚体? 羊膜，动物胶原和壳聚糖，黏多糖 组织工 程角膜 光学镜柱 周边支架 聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA）、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA）、硅凝胶、玻璃 陶瓷、氟碳聚合物、羟基磷灰石、生物材料、聚四氟乙烯 角膜设计中，较为成功的是AlphaCor、Dohlman-Doan和Osteo-Odonto， 并获得了FDA 批准，进入临床阶段。 种子细胞特点 （1）具有较高的增殖能力 （2）能够长期维持其生理功能和生物活性 种子细胞（角膜缘干细胞） 1.取材 取一块大小为1×2mm2，深度为基质前的角膜缘组织一块。 Tsai R, et al. N Engl J Med. 2000;343:86-93 2.培养 采用组织块培养法和酶消化法。所用的培养基采用DMEM与F－12培养基1：1混合，加入10％胎牛血清，5ng/ml的胰岛素，10 ng/ml的上皮生长因子。消化酶使用0.25％胰蛋白酶－0.02％EDTA的混合物。 Tsai R, et al. N Engl J Med. 2000;343:86-93 观察培养细胞的生长情况 2－3天换液一次，在倒置显微镜下观察角膜