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酶促反应的机理 (一)酶-底物复合物的形成与诱导契合假说 酶底物复合物 E + S E + P ES 中间产物(ES)学说 在酶催化的反应中,第一步是酶与底物形成酶-底物中间复合物。当底物分子在酶作用下发生化学变化后,中间复合物再分解成产物和酶。 ?许多实验事实证明了E-S复合物的存在。E-S复合物形成的速率与酶和底物的性质有关。 锁-钥学说 酶催化作用的本质是酶的活性中心与底物分子通过短程非共价力(如氢键,离子键和疏水键等)的作用,形成E-S反应中间物。 使底物的价键状态发生形变或极化,起到激活底物分子和降低过渡态活化能作用。 诱导契合假说(induced-fit hypothesis) 酶与底物相互接近时,其结构相互诱导、相互变形和相互适应,进而相互结合。 诱导契合假说 (二)具体几种可能的作用形式 趋近(邻近)和定向效应 变形或张力作用 多功能催化 酸碱催化 共价催化 金属离子催化 趋近(邻近)效应:底物分子结合在酶分子表面的某一狭小局部区域,其反应基团互相靠近,从而降低了进入过渡态所需的活化能。 定向效应:酶可使反应物在其表面对着特定的基团几何的定向。 在酶促反应中,底物分子结合到酶的活性中心,一方面底物在酶活性中心的有效浓度大大增加,有利于提高反应速度; 另一方面,由于活性中心的立体结构和相关基团的诱导和定向作用,使底物分子中参与反应的基团相互接近,并被严格定向定位,使酶促反应具有高效率和专一性特点。 趋近(邻近)效应和定向效应 张力作用 这是一个形成内酯的反应。当 R=CH3时,其反应速度比 R=H的情况快315倍。由于-CH3体积比较大,与反应基团之间产生一种立体排斥张力,从而使反应基团之间更容易形成稳定的五元环过渡状态。 酶与底物结合后使底物的某些敏感键发生变形,从而使底物接近于过渡态,同时由于底物的诱导,酶分子的构象也会发生变化,并对底物产生张力作用使底物变形,促进ES进入过渡状态。 多功能催化作用 酶的活性中心部位,一般都含有多个起催化作用的基团,这些基团在空间有特殊的排列和取向,可以对底物价键的形变和极化及调整底物基团的位置等起到协同作用,从而使底物达到最佳反应状态。 酶促反应动力学 研究各种因素对酶促反应速度的影响。 影响因素包括有 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 底物浓度对反应速度的影响 矩形双曲线 ※1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式,即米-曼氏方程式,简称米氏方程式(Michaelis equation)。 V Vmax[S] Km + [S] = 当v=Vmax/2时 Km=[S] 1. Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度,单位是mol/L。 2 = Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 Km与Vmax的意义 米氏常数Km 的意义 不同的酶具有不同Km值,它是酶的一个重要的特征物理常数。同一种酶如果有几种底物那么针对各底物的Km也不同。 Km值只是在固定的底物,一定的温度和pH条件下,一定的缓冲体系中测定的,不同条件下具有不同的Km值。 Km值表示酶与底物之间的亲和程度:Km值大表示亲和程度小,酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 催化可逆反应对对正逆两向底物的Km往往不同。测定这些Km值的差别对于了解酶在细胞内的主要催化方向及生理功能有重要意义。 测定连锁反应的不同酶的Km可以找到代谢过程的限速步骤;了解酶的Km和底物在细胞内的浓度可以推测该酶在细胞内是否受到底物的调节;测定抑制剂对特定酶的Km可以区别该抑制剂的抑制类型。 抑制剂对反应速度的影响 酶的抑制剂(inhibitor) 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂。 区别于酶的变性 抑制剂对酶有一定选择性,而变性的因素对酶没有选择性 抑制作用的类型 不可逆性抑制 (irreversible inhibition) 可逆性抑制 (reversible inhibition): 竞争性抑制 (competitive inhibition) 非竞争性抑制 (non-competitive inhibition) 反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition) 各种可逆性抑制作用的比较 ? 作用特征 竞争性 抑制 非竞争性 抑制 反竞争性抑制 与I结合的组分 E E、ES ES 表观Km 增大 不变 减小 Vmax 不变 降低 降低 酶活性的调节 (一)酶原与酶原的激活 酶原 (zymogen) 有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活
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