目的基因获取说课.ppt

第四章 目的基因的获得 目的基因 准备要分离、改造、扩增或表达的基因。 编码某种蛋白质 研究某基因结构和功能的关系 研究某基因与疾病的关系 一、基因的基本结构特征 一个能转录、翻译的结构基因依次包括以下几部分：转录启动区、核糖体识别区、编码区(包括起始密码子ATG、开放阅读框、终止密码子TAG、TAA或TGA)和转录终止区。 （一）原核生物基因的组成——操纵子 启动子：RNA聚合酶识别、结合和开始转录的片段； SD区：糖体16S rRNA识别、结合mRNA的位置； 转录终止子和终止因子：分别指基因或操纵子3’ 端提供转录终止信号的DNA序列；协助mRNA聚合酶识别终止信号的辅助蛋白。 原核的终止子在终止点之前有一回文结构，转录物形成茎环发夹 。 基因区：ATG + extrons + introns + TAA（TGA或TAG） 转录启动区：编码蛋白的启动子( RNA聚合酶Ⅱ识别)可寻找三个保守区：TATAA/TA区（Hogness框）、 CAAT框、GC框。 转录终止区:真核生物转录的终止信号并不清楚。 （二）真核生物基因的组成 二、目的基因的获得方法 目前克隆目的基因常用的方法有四种方法：化学合成法、cDNA文库法、PCR法和RT-PCR法 。 将已知序列的目的基因利用化学合成的方法直接合成。 特点：①只能合成小于100个碱基特定序列；②自动化程度较