5核酸20141224例析.ppt

? 2 起点，2 生长端，相向复制，多见于线性DNA病毒 ? 1 起点，1 复制区，单向复制，偶见于一些环形DNA的复制 ? 1 起点，2 复制区，双向复制，最为普遍 ?解旋：由拓扑异构酶解除DNA的超螺旋结构 ?解链：由解链酶使双链DNA解开 ?识别起点并生成引物：以DNA为模板在引物酶作用下完成 ?DNA的生成：在RNA引物3’末端按碱基互补原则经DNA聚合酶III催化生成 ?切除引物：由DNA聚合酶I催化切除引物即冈崎片段 ?补齐封口：DNA聚合酶I按碱基互补原则沿 5’-3’方向填补两个冈崎片段 之间的缺口，在DNA连接酶催化下最终形成模板链的新的互补链 ? 复制多个起点，RNA引物和冈崎片段较小 ? 复制速度较慢，这可能与组蛋白的存在使DNA处于稳定的双股状态有关 ? DNA聚合酶仅能催化聚合作用，没有原核细胞DNA聚合酶的外切酶作用 ? DNA片段的连结ATP供能 3、DNA复制的忠实性 （2）错配校正系统 能发现DNA双螺旋因非互补碱基对间的不对称而产生的变形，区分和切除存在于新合成的DNA中错配的核苷酸。 E.coli的错配校正系统利用dam基因编码的甲基化酶将DNA碱基序列中A在N6位甲基化，但新合成的A要晚一些才被甲基化，所以在刚合成的新DNA链中还没有被甲基化，这就能区别新DNA链和模板链 5、DNA的损伤与修复 （二）RNA的生物合成 1、真核生物和原核生物转录的差别真核生物中转录与复制在不同的区域；RNA聚合酶不相同；启动子不同；转录后RNA加工修饰不同 3、真核细胞RNA的生物合成 真核生物RNA聚合酶主要分布于细胞核内，RNA合成主要发生在细胞核中 （二）以RNA为模板合成RNA(RNA复制) 3、病毒致癌 1910年，F.P.Rous研究鸡肿瘤时发现，用滤纸滤掉细胞后的液体可诱发其它鸡的癌变，提出病毒致癌说（1966年诺贝尔医学奖） 1958年B.Dulbecco用乳头瘤病毒SV40证实病毒感染正常细胞，可将遗传物整合入宿主细胞DNA中，在分子水平阐明了病毒致癌说（1975年获医学诺贝尔奖） 3、PCR反应系统的组成： （1）耐热DNA聚合酶（Taq酶）：耐热细菌体内提取，950C，30分钟以上不会变性失活 （2）模板DNA：即待分析的目的DNA，其长度不宜大于10kb （3）引物：需要一对引物，分别位于两条互补模板DNA链的3`-端。 （4）四种脱氧核糖核苷酸：用作底物的dNTP （5）缓冲液：保证DNA聚合酶催化时所需的适当pH值，并有Mg2+存在 作业题 比较DNA和RNA在化学组成、分子结构和生物功能上的特点 DNA双螺旋结构的基本要点是什么？DNA双螺旋结构的生物学意义是什么？稳定DNA双螺旋的因素有哪些？ RNA有哪些类型？比较其结构与功能 比较DNA和RNA的水解反应难易程度，并说明产生差异的原因和其生物学意义 解释核酸的变性、复性和杂交的概念 简述PCR的基本原理及操作应注意的要点 7. 双螺旋DNA的变性温度与什么有关?为什么？ 8.通常DNA纯制品的A260／A280介于1.65和1.85之间。RNA污染会导致该比值过高，而蛋白质或者酚类物质的污染会导致该比值过低，请解释其中的原因。 9.用1mol/L的NaOH溶液水解 DNA和RNA, 水解产物是否相同，为什么？有何生物学意义？ 心有多大，舞台就有多大 无论做什么事，付诸行动尤为重要.如果说敢想就成功了一半，那么另一半就是去做。想别人不敢想的，做你自己想要做的.敢想敢做！ 5、PCR基本步骤 ? 模板DNA的变性：采用加热变性，将模板DNA或延伸后的双链DNA加热，一般选用95℃左右1min，使DNA双链解为单链 ? 复性：通过降低反应温度至适当温度，使两种引物能与两条解开的DNA互补链的3`端粘合，以提供DNA聚合酶催化聚合所需的3`-OH，按引物实际情况确定适当温度，时间一般30s至1.5min ? 延伸：反应温度提高到约72℃ ，在耐热DNA聚合酶的催化下，根据模板DNA提供的碱基顺序，合成两条互补链，从而使模板DNA扩增一倍。 ? 循环数：按初始模板浓度确定，一般25－45之间 名词解释 中心法则　 半保留复制　 定点突变 半不连续复制　有义链　　反义链　　冈崎片段 DNA的Tm值 * 十、核 酸 的 生 物 功 能 --DNA的复制和RNA的转录 （一）DNA 的 生 物 合 成----复 制 ? 分子遗传的中心法则：DNA是遗传信息的储存和发布者 ?复制：亲代DNA或RNA为模板，根据碱基配对的原则，在酶作用下，生成与亲代相同的子代DNA或RNA。 ?转录：以DNA为模板，按照碱基