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干细胞工程stem cell engineering 用人工方法，定向诱导细胞分化，产生各种特定功能细胞或组织的生物工程技术。 主要包括干细胞的分离、纯化、培养、鉴定、诱导分化与基因操作，胚胎工程及核移植等操作步骤。 干细胞的主要应用前景 胚胎发育机制及影响分化因素研究； 通过转基因动物进行基因功能研究； 动物克隆及嵌合体动物； 通过治疗性克隆进行组织修补更新； 开展遗传病研究或疾病的基因治疗； 干细胞研究回顾 1894年意大利组织学和病理学家比佐扎罗根据成体组织的生长形式，将组织分为三种类型，即不断更新组织，可生长扩大的组织，静止休眠的组织。 比佐扎罗：组织论的早期开拓者、血小板凝血功能的发现者、骨髓的造血功能研究的先驱、卡米洛·高尔基的导师、幽门螺旋杆菌的早期发现者，112年后两位科学家因再次发现此菌而获得诺贝尔奖。 干细胞研究回顾 1896年，美国WILSON论述线虫生殖系祖细胞时，首次提出干细胞的概念。 1961年，加拿大Ernest McCulloch与 James Till于首次证实各种血液细胞均来自造血干细胞，并确立自我更新、分化潜能和克隆形成能力，为干细胞的基本特性。两人被誉为“干细胞之父”。 干细胞研究回顾 1970年英国Martin Evans首次从小鼠胚囊中分离出小鼠胚胎干细胞。 1981年Martin Evans 和 Gail Martin 分别建立了小鼠胚胎干细胞系， 2007年Evans和另两位科学家（研究基因靶向）获诺贝尔奖。 人胚胎干细胞系的建立Establishment of human embryonic stem cell lines 1995年美国Thomson首次建立猴胚胎干细胞系，1998年他又和Gearhart分别从人胚泡和胎儿细胞中分离出人胚胎干细胞。在胚胎干细胞培养体系优化、遗传操作、维持多能性及分化机制等领域做出了开创性的工作。 子宫中的囊胚blastocyst In the womb 诱导多能性干细胞induced pluripotent stem cells, iPS cells 将细胞多能性相关基因导入已分化细胞，使细胞重新编程回到胚胎干细胞状态，所获得的细胞即为iPS细胞。 2006年，日本科学家山中伸弥等在前人工作的基础上，通过转染几种转录因子，将小鼠终末分化的成纤维细胞诱导成多能性干细胞。 2007年，山中伸弥通过逆转录酶转染与分化相关基因，将人皮肤细胞回复成具有胚胎干细胞特性的细胞。 诱导体细胞重新编程的方法 Reprogramming of somatic cells 体细胞核移植到卵细胞。 体细胞与卵细胞融合。 体细胞在卵细胞抽提物中孵育。 以上方法在技术、细胞来源、免疫排斥、伦理和法律等方面存在一定限制。 而iPS细胞的获得不受上述问题的限制。 诱导多能性干细胞研究的意义 细胞的命运可以逆转，不同组织间的细胞可以相互转化； 简单易行，大多实验室都可以开展； 患者自身的iPS细胞经诱导分化后重新植入，会大大减少免疫反应； 疾病特异性iPS细胞可用于筛选特异性治疗药物。 山中伸弥建立的Fbx15筛选系统 同时发现人iPS的同行 研究者：山中伸弥 VS 俞君英 同样课题 实验室：日本中山伸弥 VS 美国Thomson 发表刊物：自然 VS 科学，同日发表 细胞来源：人脸部皮肤 VS 新生儿包皮 诱导基因：四个 VS 四个，有些不同 载体：逆转录病毒整合 VS 质粒非整合 前期研究：大量系统性研究，iPS首先在 小鼠身上完成 VS 俞君英前期研究较少 多系分化持续应激细胞（Muse细胞）multilineage differentiating stress enduring cells 出澤真理等人在人的皮肤细胞中发现能发育成各种组织的新型干细胞。 人皮肤细胞经特异性分化抗原筛选出的Muse细胞，导入四种山中基因后，转变为ips的细胞多了30多倍，而其余皮肤细胞却不能。说明“分化终末细胞”诱导成ips细胞是有一定条件性的。 Muse细胞的应用前景 Muse细胞能发育多种组织，移植到动物受损部位后，可成长为受损组织特有的细胞。 受损组织对干细胞的原位分化是干细胞治疗的最理想途径。 Muse细胞是天然细胞，不容易癌变，安全性高于培养时需要植入基因的iPS细胞，但增殖程度不如iPS。 干细胞stem cells 具有自我复制的能力的，具有多种分化潜能的一类细胞。 具有自我更新能力的未分化细胞。 具有分裂能力的未分化细胞。 具有不对称性分裂潜能的细胞。 干细胞的不对称分裂Asymmetric division of stem cells 不同分化潜能