可溶性糖测定.docVIP

引言 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。 1 蒽酮比色法 1.1 原理 糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。 分光光度计电炉铝锅20ml刻度试管刻度吸管5ml 1支1ml 2支 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。 浓硫酸（比重1.84）。 20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。 表1 各试管加溶液和水的量 管 号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 1.3.3显色测定 吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。 1.3.4结果计算 可溶性糖含量(mg/g) = （从回归方程求得糖量/吸取样品液的体积）×提取液量×稀释倍数÷样品干重×10-6 2 铜还原碘量法 2.1 原理 试剂中的Cu2+与还原糖作用，生成氧化亚铜(Cu2O)沉淀。加入H2SO4后，氧化亚铜溶解生成Cu+,试剂中的KIO3与KI在酸化的同是生成I2。 KIO3+5KI+3H2SO4→3K2SO4+3H2O+3I2，然后Cu+被I2氧化，2Cu++I2 →2Cu+ + 2I- 溶液中剩余的碘以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液滴定：Na2S2O3+ I2 → Na2S2O6 + 2NaI 同时以水代替样试液做空白滴定，将空白与样品的滴定差值带入由滴定标准系列糖液计算的回归方程中，即可求得所求试样中还原糖的含量。 2.2 仪器与试剂 2.2.1实验试剂 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和GB∕T 6682 规定的至少三级水。 氢氧化钠溶液碱性铜试剂，盐酸溶液[c（HCl）=1mol∕L]，亚铁氰化钾溶液{w[K4Fe（CN）6·H2O=15％]}，硫酸锌溶液[w(ZnSO4·7H2O）6·H2O=30％]，硫酸+草酸混合液，硫代硫酸钠溶液，硫代硫酸钠工作溶液[c（Na2S2O3）=0.005mol∕L]，淀粉指示剂，酚酞指示剂，氢氧化钠溶液[c（NaOH）=0.5mol∕L]，葡萄糖标准液。 2.2.2仪器和设备 分析天平，高速组织捣碎机，电磁炉、可调温电炉或恒温水浴锅，25mL滴定管，（酸式、减式皆可），鼓风干燥箱。 2.3 实验方法 2.3.1样品制备 （1）新鲜样品：取有代表性的样品，洗净，把水吸干，用四分法取样，切碎