专题5-3《血红蛋白的提取和分离》分解.ppt

3、凝胶色谱法分离蛋白质的原理 （四）纯度鉴定 * * * 教学目标 教学重点 教学难点 理解色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理 了解缓冲液的组成及其作用 血红蛋白的提取和分离操作 凝胶色谱法的原理 电泳法分离大分子的原理 问题1： 蛋白质的分离的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 问题2： 蛋白质的分离的方法？ 1、凝胶色谱法（分配色谱法） 2、凝胶电泳法 一、基础知识： ㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、凝胶： 2、分离依据： 分离的蛋白质的相对分子质量的大小 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子 的差速流动。 1、概念： ㈡ 缓冲溶液(洗脱剂)： 2、作用： 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性） 2、原理：在电场的作用下，这