流感病毒临床标本的采集方法、运输、保存(郑).ppt

流感病毒临床标本的采集方法、运输、保存处理 概 述 流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节 多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织 一、采样对象和时间 采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物 ）、人禽流感待查病例 流感样病例:发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据 采集时间：病人发病后的头三天 二、采样液要求 常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.4-7.6的Hank’s液，Eagel`s培养液或水解乳蛋白溶液 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素 标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存 三、临床标本的采集 常用的标本种类： 咽拭子 鼻拭子 漱口液 鼻咽吸取物 鼻洗液 1、咽拭子 用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去 2、鼻拭子 将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去 3、鼻咽吸取物 用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次 吸取过程 4、漱口液 用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液 5、鼻洗液 患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔 四、标本收集注意事项 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护 采集标本要有一定力度 标本采集后应迅速至于冰上或者4 ℃以下保存，因为流感病毒对热很敏感 标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别， 采样日期 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 ℃或以下 五、临床标本的运送要求 新鲜的临床采集标本 应在4℃条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存 冻存的临床采集标本 应在冻存的条件下，低温送至实验室 六、临床标本的处理原则 新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存 冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存 七、临床标本的处理方法 含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出 鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存 鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存 肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。接种细胞或鸡胚 八、临床标本的的处理原则 临床标本处理后，将原始标本分为三份:一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月 流感病毒株的运输 寄送流感毒株标本的包装要求 病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本 直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里 将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料 标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法 九、禽流感标本采集的生物安全防护 1．采集人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。 2. 人禽流感标本的运送、接收和保藏应当符合我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）的有关要求。 3．人禽流感临床标本的处理、分装在生物安全二级的实验室里进行，采用生物安全三级