荧光定量PCR-.pptxVIP

实时定量PCR（Real-time quantitative PCR）常规PCR结合电泳分析方法的局限性只能对终产物进行分析，无法对起始模板准确定量必须在扩增反应结束后借助电泳方法分析，费时费事无法对扩增反应实时监测 由于许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生。一 什么是实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累计实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法PCR和RT-PCR区别 荧光定量PCR仪器组成不同厂家仪器样式不同染料实时荧光定量 PCR 的化学原理包括探针类和非探针类两种，探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类则是利用荧光染料或者特殊设计的引物来指示扩增产物的增加。前者由于增加了探针的识别步骤，特异性更高，但后者则简便易行。常用荧光标记方法SYBR Green I染料法Taqman探针法SYBR Green I染料法——原理 1. SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。 2. 这种高灵敏度，较低毒性