黄刺玫花粉收集.doc

黄刺玫花粉收集、贮藏及生活力测定 全超 （齐齐哈尔大学生命科学与农林学院园艺101，齐齐哈尔 161006） 摘要：为了探明黄刺玫花粉生活力测定方法以及适宜的贮藏方法，采用培养基发芽法、TTC(氯化三苯基四氮哇)染色法和放在不同条件下贮藏等方法研究了花粉寿命长短与环境条件的关系。结果表明在同一时间内采集的花粉生活力83.3%-95.9%之间。 关键词：黄刺玫，生活力，TTC染色法 引言:黄刺玫为蔷薇科蔷薇属有刺落叶灌木，【1】其别名黄刺梅、刺玫花、硬皮刺玫。落叶丛状灌木，高可达3米。小枝红褐色，有硬直扁平的皮刺。奇数羽状复叶，小叶常7—l3枚，通常为9枚，近圆形或椭圆形，边缘有锯齿。托叶小，卜部与叶柄连生，先端分裂成披针形裂片。花黄色，直径约4厘米，单瓣或重瓣，径约4.5一5cm，花期为4月下旬至5月中上旬。由于其株行清秀，叶片秀丽，花色艳丽，且花期较长，是北方园林中重要的春季观花灌木【2】。宜于草坪、林缘、路边、庭院等处丛植，还可作花篱。 植物花粉贮藏技术研究是开花生物学特性研究中的一项重要内容【3】。花粉是种子植物体的雄性生殖细胞，它是植物赖以繁衍后代的“精子”，是植物体中最精华之所在。在很多情况下，花粉生活力的测定显得十分重要，如外地采集来的花粉或杂交时父本花期早于母本时需要将花粉进行短暂贮藏时，自交或远缘杂交为了分析结实率或不结实原因时需要了解花粉的生活力。但目前，关于黄刺玫的研究多集中在黄刺玫的组织培养和快速繁殖【4】、扦插繁殖、花器构件等方面，而关于黄刺玫花粉收集、贮藏及生活力测定的研究尚未有人报道。进行黄刺玫贮藏及生活力测定，可以为花粉的保存及杂交育种提供可靠的理论依据。根据其他人对蔷薇科植物做的研究，预计贮藏温度越低生活力持续时间越长发芽率越高，而且一天中生活力最高的时间应该是上午十点到下午两点。 1 试验方法和实验方案 试验方法 1.1.1新鲜花粉生活力测定 花粉生活力测定采用TTC法【5】。加1—2滴0. 5%TTC溶液于载玻片上，取少许黄刺玫花粉，搅拌均匀后盖上盖玻片。置于35—40℃烘箱中培养15—20分钟，然后在显微镜下观察，凡被染为红色的花粉生活力强，淡红色次之，无色者为没有活力或不育花粉。分别在显微镜下选取5个清晰的视野，每个视野统计20个左右，统计100粒左右，然后计算花粉生活力百分率，3次重复。 1.1.2花粉贮藏力测定 将黄刺玫的花粉放入不同条件下做贮藏试验。实验条件分别为:(1)低温0—4℃冷藏，无光照(冰箱中);(2)室温25℃左右，无光照;(3)低温-20℃冷藏，无光照(冰箱中)。 每天取出少量花粉，并用TTC法测定花粉生活力，从采集当天开始至四天后，以便找出最适贮藏条件。 1.1.3花粉发芽力测定 采用培养基发芽法【6】。用吸管吸取10%的蔗糖培养基液，在载玻片的中央滴一小滴，使之成为表面圆整的半球面，待凝固后将花粉均匀的抖落在培养基上，把播有花粉的载玻片放在铺有两层湿润滤纸的培养皿中，再用有两层湿润滤纸的培养皿盖上，然后置于25℃的恒温箱内，24小时后在显微镜下观察5个视野，总数超过100,分别计算其发芽率，求其平均值。 实验方案 实验前一天，从黄刺玫树上，按早上8—9点、中午12一1点、下午6—7点三个时间段采集即将开放的、大小基本一致的花蕾，每个时间段设置三次重复。再在同一时间采集大小基本一致的花蕾，用来进行不同贮藏条件下花粉生活力的比较，同样每个贮藏条件设置三次重复。采集回来以后将花蕾放在黑暗条件下阴干一天，待花蕾散粉后，筛除杂质，将纯净的花粉用硫酸纸包好，放在锥形瓶中。以时间为变量的都贮藏在-20℃条件下，以贮藏条件为变量的分别贮藏在室温、0—4℃、- 20℃三个条件下。 2 结果与分析 2. 1不同贮藏条件花粉生活力测定 采用TTC法对三个贮藏条件下的花粉生活力进行测定(表1)。研究表明，温度是影响花粉生活力的重要因素，温度与花粉贮藏寿命呈负相关性。一般情况下，温度越低，花粉贮藏寿命越长【2】。同样，试验结果也表明，在-20℃的条件下花粉生活力最高，生活力保持时间也最长;在0—4℃条件下生活力次之;室温下生活力最低，持续时间也最短。 2. 2不同采集时间花粉生活力测定 同样采用TTC法(表2)。试验结果表明:上午采集的花粉生活力最高，中午次之，晚上的生活力最低。 2. 3不同采集部位花粉生活力测定 采用TTC法(表1)。试验结果表明: 2.4不同采集时间花粉发芽力测定 采用培养基发芽法。一天后观察，基本上没有萌发;两天后上午采集的有30%的开始萌芽，其他时间的没有萌芽; 四五天以后上午采集的仍然没有超过花粉粒直径两倍以上，所以不能算发芽; 其他的仍然没有萌芽。所以，发芽试验算是做失败了。 3 结论与讨论 本次实验表明，