第二章基因工程的工具酶2教程方案.pptVIP

第二章 基因工程的载体和工具酶 2.4 基因工程工具酶 1.工具酶的概念 应用与基因工程的各种酶的总称. 切: 连: 修饰: 3. DNA聚合酶 (1)大肠杆菌DNA聚合酶I （E.coli DNA pol I)： 具有三种酶活性 a、5’ ---3’DNA聚合酶活性 CCGATA-OH E.coli DNA pol I CCGATAGCCT GGCTATCGGA Mg2+ dNTP GGCTATCGGA b、3’ ---5’ 外切酶活性 CGCATCG-OH E.coli DNA pol I CGC ATCG GCG Mg2+ dNTP GCG c、5’ ---3’外切酶活性 CGCATTAG E.coli DNA pol I CATTAG GCGTAATC Mg2+ GCGTAATC (2).Klenow酶：也称DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’ --3’外切酶活性 Klenow酶的基本用途： a.补平由核酸内切酶产生的5‘粘性末端 b.DNA片段的同位素末端标记 c.cDNA第二链的合成 d.双脱氧末端终止法测定DNA序列 4. D