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SDS总结 SDS——Sodium dodecyl sulphatepolyacrylamide gel electrophoresis 该方法可对蛋白质的组分进行分离，并可精确测得蛋白质的分子量。常用的方法为SDS不连续系统。 一、聚丙烯酰胺凝胶(PAG)基本原理： 聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和N,N’-亚甲基双丙稀酰胺（N,N’-methylene bis acrylamide）经共聚合而成。此聚合过程是由四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine，TEMED）和过硫酸胺（ammonium persulfate，AP）激发的。被激活的单体和未被激活的单体开始了多聚链的延伸，聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链。正在延伸的多聚链也可以随机地接上双丙稀酰胺，使多聚链交叉互连成为网状立体结构，最终多聚链聚合成凝胶状，具有三维网状结构，能起分子筛作用。用它作电泳支持物，对样品的分离取决于各组分所带电荷的多少及分子大小。 含40％ acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和bisacrylamide的比例为39:1。 丙烯酰胺： 吸烟、淀粉类食品高温（ 120℃）烹调，可产生丙烯酰胺。进入人体内的丙烯酰胺约90％被代谢，仅少量以原形经尿液排出。丙烯酰胺进入体内后，会在体内与DNA上的鸟嘌呤结合形成加合物，导致遗传物质损伤和基因突变。丙烯酰胺具有神经毒性作用。丙烯酰胺属中等毒类，在体内有蓄积作用，主要影响神经系统，急性中毒十分罕见。 N.N-亚甲基双丙烯酰胺（甲叉）： 双叫N.N-甲叉双丙烯酰胺，次甲基双丙烯酰胺，N.N-甲撑双丙烯酰胺。是一种白色晶体粉末，无味，吸湿性极小。遇高温或强光则自交联，微溶于水、乙醇。 在它的结构中具有两个相同且非常活泼的反应性官能团 , 可作为交联剂 ,能将线性高分子迅速转变为体型高分子 , 制备吸水性聚合物 , 还可与各种离子型单体发生聚合反应 ,使其在石油开采以及医药、水处理等行业具有广泛用途。 N,N,N,N-四甲基二乙胺 (TEMED)： TEMED即N,N,N‘,N’-Tetramethylethylenediamine，中文名为N,N,N‘,N’-四甲基二乙胺。分子式为(CH3)2NCH2CH2N(CH3)2，?分子量为116.20。TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。 易燃，有腐蚀性。 过硫酸铵（APS）： 分子式(NH4)2S2O8 分子量: 228.20 。是一种白色、无味晶体，常作强氧化剂使用，也可用作单体聚合引发剂。它几乎不吸潮，由于能达到很高的纯度而具有特别好的稳定性，便于储存。过硫酸铵属于非易燃品，但能释放氧而有助燃作用。必须存放在干燥、密闭的容器中，应避免阳光直射、热源、潮湿等不利因素。过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基。 过硫酸铵（APS）——四甲基二乙胺 (TEMED)系统 ： 在Acr 和Bis的溶液中放入这个催化系统后，过硫酸铵[（NH4）2S2O8]产生出游离氧原子使单体成为具有游离基的状态，从而发生聚合作用。聚合的初速度和过硫酸铵浓度的平方根成正比。这种催化系统需要在碱性条件下进行。例如，在pH 8.8条件下7％的丙烯酰胺溶液30分钟就能聚合完毕；在 pH 4.3时聚合很慢，要90分钟才能完成。温度与聚合的快慢成正比。通常在室温下就很快聚合，温度升高聚合更快。如将混合后的凝胶溶液放在近0℃的地方，就能延缓聚合。一般来讲，温度过低、氧分子或不纯物质存在，都能延缓凝胶的聚合。为了防止溶液中气泡含有氧分子而妨碍聚合，在聚合前须将溶液分别抽气，然后再混合。 二、SDS电泳原理 十二烷基硫酸钠（SDS）： Sodium dodecyl sulphate，即SDS。SDS是一种阴离子去污剂，又是阴离子型表面活性剂。在电泳体系中加入一定浓度的SDS，SDS以一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质分子带负电荷，这种负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷，从而减低或消除了各种蛋白质分子天然电荷的差异，使蛋白质均带有相同密度的负电荷，因而可利用分子量的差异将各种蛋白质分开。与PAGE技术结合，则谱带差异更加明显、清晰，并可测定蛋白质分子量。 甘氨酸： 最广泛使用的不连续缓冲系统最早是由Ornstein(1964) 和Davis(1964) 设计的，样品和浓缩胶中含 Tris-HCl(pH 6.8), 上下槽缓冲液含Tris-甘氨酸(pH 8.3), 分离胶中含Tris-HCl(pH 8.8)。系统中所有组分都含有0.1% 的 SDS(Laemmli, 1970)。样品和浓缩胶中的氯离子形成移动界面